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<table><tbody><tr><td>0.45 micron filter</td><td>Sigma</td><td>S2HVU02RE</td><td></td></tr><tr><td>12k or 92k oligo chip</td><td>Customarray Inc. (Genscript)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 cm cell culture plates</td><td>Corning</td><td>CLS353004</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>293NT</td><td>Systems Biosciences</td><td>LV900A-1</td><td></td></tr><tr><td>Alkaline phosphatase</td><td>NEB</td><td>M0290L</td><td></td></tr><tr><td>Amplicillin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>9804S</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>P0756S</td><td></td></tr><tr><td>Cutsmart buffer</td><td>NEB</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>Deep sequencing (Next-Seq or Hi-Seq)</td><td>Illumina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNAesy Blood and Tissue DNA extraction kit</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s modified Eagle medium</td><td>Wisent</td><td>319-015-CL</td><td></td></tr><tr><td>Endura electrocompetent cells</td><td>Lucigen</td><td>60242-1</td><td></td></tr><tr><td>EpiCult-B Mouse Medium Kit</td><td>Stemcell Technologies</td><td>05610</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I</td><td>NEB</td><td>R0734L</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Wisent</td><td>090-150</td><td></td></tr><tr><td>Gel DNA-cleanup kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4008</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser/MicroPulser Electroporation Cuvettes</td><td>BioRad</td><td>1652089</td><td></td></tr><tr><td>Gentle Collagenase/Hyaluronidase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7919</td><td></td></tr><tr><td>H11-Cas9</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#028239</td><td></td></tr><tr><td>High-Speed Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>MLS-50</td><td></td></tr><tr><td>Kim-wipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar</td><td>Wisent Technologies</td><td>800-011-LG</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instrument</td><td>P97</td><td></td></tr><tr><td>Mini-prep plasmid Kit</td><td>Frogga Bio</td><td>PDH300</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3.1 (Buffer for BsmBI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Oligo Clean and Concentrator</td><td>Zymo Research</td><td>D4061</td><td></td></tr><tr><td>Oligo cleanup kit</td><td>Zymo research</td><td>D4060</td><td></td></tr><tr><td>PAGE purified illumina sequencing primer</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR Micropipettes</td><td>Drummond</td><td>5-000-1001-X10</td><td></td></tr><tr><td>PEI (polyethyleneimine)</td><td>Sigma</td><td>408727-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin and Streptinomycin</td><td>Wisent</td><td>450-201-EL</td><td></td></tr><tr><td>pLKO-Cre</td><td>Addgene</td><td>158032</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Sigma</td><td>P2636-100MG</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>pXPR502-PPH-Cre</td><td>Addgene</td><td>256776</td><td></td></tr><tr><td>Q5 Polymerase 2x Master mix</td><td>NEB</td><td>M0494L</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometric Quantification</td><td>Invitrogen</td><td>Q33327</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-Cas9-EGFP</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#024857</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-TdTomato mice</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#007909</td><td></td></tr><tr><td>SapI</td><td>NEB</td><td>R0569L</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA ligase</td><td>NEB</td><td>M0202L</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-centrifuge tubes</td><td>Beckman Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Vacuum Filter Units</td><td>Fisher Scientific</td><td>SCHVU02RE</td><td></td></tr></tbody></table>

cribado in vivo paralelo de la eliminación y activación génica en la glándula mamaria del ratón

Parallel In Vivo Screening of Gene Knockout and Activation in the Mouse Mammary Gland

Cribado in vivo paralelo de la eliminación y activación génica en la glándula mamaria del ratón

Forward genetics screens are routinely employed to perturb thousands of genetic elements in a pooled fashion with the goal of producing large-scale ...

parallel-vivo-screening-gene-knockout-activation-mouse-mammary

Research

Investigación

JoVE Journal

Genetics

Genética

Este método describe la forma de analizar y evaluar el desarrollo de la glándula mamaria y la función de los ratones. Extirpado las glándulas mamarias son evaluados por el grado de desarrollo con montaje completo, mientras que la eyección de leche se evaluó mediante un ensayo basado en la oxitocina contracción de las células mioepiteliales.

Evaluación de la glándula mamaria de desarrollo y función en modelos de ratón

Imagen de lapso de tiempo se utiliza para evaluar el comportamiento de las células mamarias preneoplásicas primarias epiteliales derivadas de los modelos de ratón genéticamente modificadas de riesgo de cáncer de mama para determinar si existen correlaciones entre los parámetros de comportamiento específicas y distintas lesiones genéticas.

Time-lapse de imágenes de Primaria preneoplásicas células epiteliales mamarias derivadas de los modelos de ratones genéticamente modificados del cáncer de mama

Un protocolo para la entrega intraductal no invasiva de los reactivos acuosos para la glándula mamaria de ratón se describe. El método se aprovecha de la inyección localizada en los pezones de las glándulas mamarias dirigidos específicamente conductos mamarios. Esta técnica es adaptable para una variedad de compuestos que incluyen ARNsi, agentes quimioterapéuticos y moléculas pequeñas.

Inyección intraductal de entrega de la droga localizada a la glándula mamaria de ratón

La activación de mutaciones latentes con adenovirus Cre en los resultados del sistema ductal de mama en un cáncer de mama metastásico clínicamente relevante. La incorporación de un promotor YFP permite el seguimiento de las células tumorales metastásicas distales. Este modelo es útil para estudiar la metástasis latentes, la inmunidad anti-tumoral, y para el diseño de nuevas inmunoterapias para tratar el cáncer de mama.

Inicio de la metástasis de carcinoma de mama mediante la Focalización del epitelio ductal con adenovirus Cre: Un modelo de ratón transgénico de Novela del Cáncer de Mama

El cáncer es una enfermedad compleja que se ve influenciada por el tejido que rodea al tumor, así como pro- local y anti-inflamatorias mediadores. Por lo tanto, los modelos de inyección de ortotrópicos, en lugar de los modelos subcutáneos pueden ser útiles para estudiar la progresión del cáncer de una manera que imita mejor la patología humana.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Aquí describimos el protocolo estándar para la detección de actividad de β-galactosidasa en embriones de ratón todo principios y el método de parafina de seccionamiento y contratinción. Este es un procedimiento fácil y rápido para controlar la expresión génica durante el desarrollo que puede aplicarse también a las secciones de tejido, órganos o células cultivadas.

Seguimiento de la expresión génica mediante la detección de actividad de β-galactosidasa en embriones de ratón todo

El objetivo de este protocolo es describir un nuevo enfoque de modelado de cáncer de mama basado en la inyección intraductal de adenovirus Cre-expressing en las glándulas mamarias del ratón. Este enfoque permite la manipulación específica del tipo de célula y del órgano de los eventos oncogénicos de una manera controlada temporalmente.

Modelar el cáncer de mama a través de una inyección intraductal de Adenovirus C-expreso en la Glándula Mamaria del Ratón

Los modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) y los modelos de ratón genéticamente modificados trasplantables recapitulan fielmente la enfermedad humana y son modelos preferidos para la investigación básica y traslacional del cáncer de mama. Aquí, se describe un método para trasplantar ortotópicamente fragmentos de tumores de mama en la almohadilla de grasa mamaria para estudiar la biología del tumor y evaluar la respuesta al fármaco.

Trasplante ortotópico de tumores de mama como modelos preclínicos para el cáncer de mama

Este protocolo describe una nueva ventana de imágenes mamarias con una tapa reemplazable (R.MIW). La microscopía intravital después de la implantación del R.MIW permite obtener imágenes longitudinales y de varios días de la glándula mamaria sana y enferma con una resolución celular durante las diferentes etapas del desarrollo.

Microscopía intravital longitudinal con una ventana de imágenes mamarias con tapa reemplazable

El presente protocolo describe una técnica sencilla para la obtención de imágenes intravitales de la glándula mamaria de ratón lactante mediante microscopía confocal y multifotónica de barrido láser.

Microscopía subcelular intravital de la glándula mamaria

El presente protocolo describe la inyección intraductal de vectores virales a través de la tetina para administrar genes de interés en las células epiteliales mamarias.

In vivo Entrega de genes en células epiteliales mamarias de ratón a través de inyección intraductal mamaria

Mount Sinai Hospital.  Este protocolo describe un enfoque escalable de cribado intraductal CRISPR que permite estudios paralelos in vivo de eliminación y activación génica en la glándula mamaria del ratón.

Cribado in vivo paralelo de la eliminación y activación génica en la glándula mamaria del ratón

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