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<ol><li>Winden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberous+sclerosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Tuberous sclerosis complex.</a> Nat Rev Dis Primers. 12, 11(2026).</li>
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<li>Zabegalov, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+repetitive+behaviors+in+zebrafish+and+their+relevance+to+human+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Abnormal repetitive behaviors in zebrafish and their relevance to human brain disorders.</a> Behav Brain Res. 367, 101-110 (2019).</li>
<li>Scheldeman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-related+neuropathology+in+mutant+tsc2+zebrafish%3A+phenotypic%2C+transcriptomic+and+pharmacological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">mTOR-related neuropathology in mutant tsc2 zebrafish: phenotypic, transcriptomic and pharmacological analysis.</a> Neurobiol Dis. 108, 225-237 (2017).</li>
<li>Ilyin, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+intracerebroventricular+lipopolysaccharide+administration+on+behavioral%2C+neurochemical%2C+and+neurogenomic+responses+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of intracerebroventricular lipopolysaccharide administration on behavioral, neurochemical, and neurogenomic responses in adult zebrafish.</a> Behav Brain Res. 493, 115676(2025).</li>
<li>Luo, R., Yao, Y., Chen, Z., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+examination+of+the+LPS-TLR4+immune+response+through+the+analysis+of+molecular+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">An examination of the LPS-TLR4 immune response through the analysis of molecular structures and protein-protein interactions.</a> Cell Commun Signal. 23, 142(2025).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Cápsides de vidrio borosilicato (Diámetro exterior 1.0 mm/ diámetro interior 0.75 mm)</td><td>Sutter Instrument</td><td>BF150-75-10</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (cloruro de calcio)</td><td>Chempur</td><td>118748703</td><td></td></tr><tr><td>Diapositiva de calibración (1/100 mm)</td><td>Bresser</td><td>5916710</td><td></td></tr><tr><td>Portacapilar (Juego de pinza 4 tamaño 0)</td><td>Fertilart Sp. z o.o</td><td>5196082001</td><td></td></tr><tr><td>Extrusor de micropipetas Flaming/Brown</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Chempur</td><td>115752837</td><td></td></tr><tr><td>IL6 humano</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>200-06-20UG</td><td>Concentración en stock: 10 &micro;g/mL, Concentración de trabajo: 2 pg/nL (diluido en NaCl 0.9%)</td></tr><tr><td>Bomba inyectora FemtoJet 4i</td><td>Eppendorf</td><td>E5252000021</td><td></td></tr><tr><td>KCl (cloruro de potasio)</td><td>Chempur</td><td>117397402</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot;6H2O (cloruro de magnesio hexahidrato)</td><td>Chempur</td><td>116120500</td><td></td></tr><tr><td>Puntas Microloader Femtotips para Microinyector Femtojet</td><td>Eppendorf</td><td>EPE 5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Leica M165 FC 1983 aumentos</td><td>Leica Microsysytems</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/ light-microscopes/stereo-microscopes/p/leica-m165-fc/</td><td></td></tr><tr><td>Aceite mineral</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (cloruro de sodio)</td><td>Chempur</td><td>117941206</td><td></td></tr><tr><td>Pronasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td>Concentración en stock: 20 mg/mL (preparada en agua ultrapura), Concentración de trabajo: 0.5 mg/mL (diluida en E3)</td></tr><tr><td>Tricaina</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Base de Tris</td><td>Carl Roth</td><td>4855.3</td><td></td></tr><tr><td>Azul de Tripán</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Agarosa UltraPure de bajo punto de fusión</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Extensión ZebraBox - Respuesta de foto motor EZBPMR</td><td>Animalab</td><td>https://animalab.eu/zebrabox-high-throughput-monitoring-system</td><td></td></tr><tr><td>Zebrabox</td><td>ViewPoint</td><td>https://www.viewpoint.fr/product/zebrafish/fish-behavior-monitoring/zebrabox</td><td>Cámara de análisis automatizada</td></tr></tbody></table>

microinyección de interleucina-6 en el torrente sanguíneo de larvas de pez cebra con tsc para estudiar comportamientos similares a trastornos neuropsiquiátricos

Microinjection of Interleukin-6 into the Bloodstream of TSC Zebrafish Larvae to Study Neuropsychiatric Disorder-Like Behaviors

Microinyección de interleucina-6 en el torrente sanguíneo de larvas de pez cebra con TSC para estudiar comportamientos similares a trastornos neuropsiquiátricos

Patients with tuberous sclerosis complex (TSC1/TSC2 mutations) exhibit variable expressivity of autism spectrum disorder (ASD), and maternal immune ...

Mi investigación examina cómo la inflamación inducida por IL-6 interactúa con mutaciones genéticas de riesgo para el autismo y afecta el desarrollo y la función cerebral. A diferencia de la inflamación inducida por LPS, que es más generalizada, este protocolo eleva selectivamente la IL-6, permitiendo investigar con precisión los efectos neurodesarrolladores específicos de esta citocina. Para comenzar, reúna las agujas de microinyección, los reactivos necesarios y los embriones de pez cebra de dos días post-fecundación.Prepare una solución de agarosa al 1 % peso por volumen en medio E3 y caliéntela hasta que la agarosa se disuelva completamente y la solución se vuelva transparente. Deje enfriar brevemente la solución de agarosa. Vierta aproximadamente 30 mililitros en una placa de Petri de 100 milímetros para asegurar una capa uniforme sobre la superficie.Mientras el agarosa aún esté líquido, pero comience a solidificarse, coloque suavemente un molde de silicona sobre la superficie para crear surcos uniformes. Transfiera aproximadamente 100 embriones corionados de dos días post-fecundación a una pequeña placa de Petri de 50 milímetros recubierta con agarosa. Añada cuatro mililitros de solución de pronasa recién preparada al recipiente, asegurándose de que los embriones queden completamente sumergidos.Incubar a temperatura ambiente durante tres a cinco minutos. Bajo un microscopio estereoscópico, observar la liberación de los embriones de las corionas. Girar o agitar suavemente el recipiente de forma intermitente para facilitar la eliminación enzimática de las corionas.Continúe hasta que la mayoría de los embriones sean liberados de sus corionas. Lave minuciosamente los embriones transfiriéndolos a través de cinco o seis cambios de medio embrionario E3 fresco. Asegúrese de eliminar todas las corionas y restos de pronasa para prevenir daños en las larvas y mantener condiciones óptimas de cultivo.Utilizando una pipeta de Pasteur de vidrio, transfiera aproximadamente 50 larvas descorionadas a una placa de Petri de 100 milímetros que contenga 40 mililitros de medio E3. Mantenga las larvas en medio E3 hasta la microinyección. Bajo un microscopio estereoscópico, use pinzas finas para romper cuidadosamente la punta de la capilar de vidrio previamente preparada y generar una micropipeta con una abertura de aproximadamente tres micrómetros de diámetro.Prepare una solución de cloruro de sodio al 0,9 % peso por volumen para las inyecciones de control. Y una solución de dos picogramos por nanolitro de interleucina 6 o IL-6 en cloruro de sodio al 0,9 % para las inyecciones de IL-6. Añada un microlitro de azul de tripano al 0,05 % por cada 10 microlitros de solución de inyección para facilitar la visualización durante la inyección.Con una pipeta, cargue la solución en una punta de microcargador. Luego, utilice la punta de microcargador para rellenar la aguja de inyección micropipeta preparada con aproximadamente tres microlitros de solución de inyección, asegurándose de no introducir burbujas de aire. Fije la aguja de inyección cargada en el soporte de capilar para conectarla al sistema de microinyección.Luego, coloque una pequeña gota de aceite mineral sobre una placa de calibración. Calibre el volumen de inyección expulsando gotas dentro del aceite mineral. Mida el diámetro de la gota utilizando la placa de calibración con una escala de 0,01 milímetros.Ajuste la presión de inyección para lograr un volumen de gota de aproximadamente un nanolitro. Anestesie las larvas en pequeños lotes añadiendo tricaina al medio E3 hasta una concentración final de 1X para minimizar el estrés y asegurar una sedación constante. Transfiera larvas individuales de dos días post-fecundación a una placa de inyección con agarosa solidificada.Coloque el platillo bajo el microscopio estereoscópico. Utilizando una pipeta de vidrio, oriente suavemente cada larva de manera que el conducto de Cuvier sea claramente visible y accesible. Posicione la punta de la micropipeta en el punto de entrada del conducto de Cuvier siguiendo las células sanguíneas que se mueven hacia el corazón bajo el microscopio estereoscópico.Injecte la primera gota de la solución preparada en el conducto de Cuvier. Después de aproximadamente 20 segundos, inyecte una segunda gota en el conducto de Cuvier. Tras la inyección, transfiera suavemente las larvas a una placa de Petri fresca de 100 milímetros que contenga 40 mililitros de medio E3.Devuelva las larvas a un incubador a 28,5 grados Celsius para su recuperación. Al día siguiente, repita el procedimiento de microinyección tal como se demostró previamente. A los cinco días post-fertilización, utilice las larvas para aplicaciones posteriores, incluyendo ensayos conductuales, imágenes cerebrales o análisis de inmunofluorescencia.La microinyección de IL-6 no afectó la viabilidad larvaria en comparación con las inyecciones de cloruro de sodio. Las tasas de supervivencia a los cinco días posteriores a la fertilización fueron indistinguibles entre los grupos inyectados con IL-6 y los inyectados con NACL, lo que indica que el régimen de dosificación es bien tolerado y no introduce toxicidad inespecífica. Las microinyecciones redujeron ligeramente la viabilidad en comparación con los hermanos no inyectados.Los mutantes homocigotos del complejo de esclerosis tuberosa 2, o TSC2, mostraron niveles de prostaglandina E2 o PGE2 significativamente más altos en condiciones basales que los hermanos de tipo salvaje. Los mutantes heterocigotos de TSC2 mostraron un aumento modesto e insignificante en los niveles basales de PGE2 en comparación con los hermanos de tipo salvaje. Los niveles de PGE2 aumentaron bruscamente en los mutantes heterocigotos de TSC2 tras la microinyección de IL-6.La prueba del campo abierto mostró que los mutantes TSC2 presentaron un comportamiento similar a la ansiedad aumentado en comparación con los hermanos de tipo salvaje en los controles no inyectados, y las microinyecciones de IL-6 no afectaron este comportamiento. Los mutantes TSC2 heterocigotos y homocigotos pasaron significativamente más tiempo en la zona periférica de la arena y exhibieron una exploración reducida del centro en comparación con los hermanos de tipo salvaje en los controles no inyectados, así como en las larvas TSC2 inyectadas con IL-6. Las inyecciones de IL-6 incrementaron patrones repetitivos de nado estereotipados, particularmente en los mutantes TSC2 heterocigotos.La proporción de mutantes heterocigotos TSC2 inyectados con IL-6 que presentaron bucles repetitivos aumentó significativamente en comparación con los controles inyectados con cloruro de sodio. Este protocolo permite realizar estudios controlados sobre la inflamación inducida por IL-6 para evaluar los efectos del entorno genético en el neurodesarrollo y el comportamiento en pez cebra. Las consideraciones clave al realizar este protocolo incluyen un tamaño constante de la aguja, un volumen de inyección preciso de dos nanolitros y la minimización del tiempo de los larvas fuera del medio E3. Futuros estudios pueden investigar cómo la inflamación por IL-6 y el riesgo genético afectan conjuntamente el desarrollo cerebral y el comportamiento.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Microinyección es un método bien establecido y eficaz para la introducción de sustancias extrañas en embriones de pez cebra fecundado. Este sentido, demuestran una sólida técnica de microinyección para la realización de la sobreexpresión de ARNm, y morpholino oligonucleótidos estudios caída de genes en el pez cebra.

Microinyección de ARNm y oligonucleótidos antisentido Morpholino en embriones de pez cebra.

Este vídeo muestra cómo morfolino o ARNm puede ser inyectado en embriones de pez cebra en el estadio de una célula para aumentar o disminuir el nivel de productos específicos de genes durante el desarrollo posterior.

Microinyección de embriones de pez cebra para analizar la función génica

El rápido desarrollo de tamaño pequeño y la transparencia del pez cebra son grandes ventajas para el estudio del control inmunitario innato de la...

La imagen no invasiva de la candidiasis diseminada en larvas de pez cebra

El video muestra la microinyección de lipopolisacáridos (LPS) en el cerebro de larvas de pez cebra para inducir neuroinflamación. Las larvas se colocan en una placa revestida de agarosa, la aguja se inserta en los ventrículos cerebrales y se inyecta el LPS. El LPS inyectado desencadena una respuesta inmunitaria que conduce a la neuroinflamación.

Inducción de neuroinflamación en larvas de pez cebra con una inyección de lipopolisacárido

En este artículo se demuestra un método para la manipulación de la expresión génica en las células ventriculares del telencéfalo adultos de pez cebra utilizando oligonucleótidos antisentido morpholino. Se presenta este método como un protocolo eficiente y rápida que puede ser utilizado para los estudios funcionales en el cerebro de los vertebrados adultos.

Micromanipulación de la expresión génica en el cerebro de pez cebra adulto Uso Microinyección cerebroventricular de oligonucleótidos Morpholino

Microinyección de embriones de pez cebra y larvas es una técnica difícil pero crucial en muchos modelos de pez cebra. Aquí, presentamos una gama de herramientas de microescala para ayudar en la estabilización y la orientación del pez cebra para la microinyección y la proyección de imagen.

Dispositivos microestructurados para microinyección optimizado y la proyección de imagen de larvas de pez cebra

Aquí, presentamos un protocolo para el desarrollo y la caracterización de un modelo de epilepsia de pez cebra resultante de la inhibición transitoria del gen DEPDC5.

Análisis conductual y fisiológico en un modelo de epilepsia de pez cebra

Este protocolo demuestra la microinyección de lipopolisacárido en la región ventricular cerebral en un modelo larvario de pez cebra para estudiar la respuesta neuroinflamatoria resultante y la neurotoxicidad.

Microinyecciones ventriculares cerebrales de lipopolisacárido en larvas de pez cebra para evaluar la neuroinflamación y la neurotoxicidad

Demostramos un método que aprovecha la microscopía confocal de barrido rápido para realizar imágenes en vivo de las células de la microglía en el tectum óptico del pez cebra en desarrollo, lo que permite el análisis de la dinámica de estas células in vivo.

Imagen en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía en el embrión de pez cebra

Las rasopatías son síndromes genéticos multisistémicos causados por la hiperactivación de la vía RAS-MAPK. Las variantes potencialmente patógenas que están a la espera de validación surgen continuamente, mientras que la escasa evidencia preclínica limita el tratamiento. Aquí, describimos nuestro protocolo in vivo para probar y validar los niveles de activación de ERK asociados a RASopatía y su modulación farmacológica durante la embriogénesis mediante imágenes FRET en vivo en pez cebra...

Un protocolo eficiente para evaluar la modulación de la actividad de ERK en modelos tempranos de síndrome de Noonan de pez cebra mediante microscopía FRET en vivo e inmunofluorescencia

International Institute of Molecular Mechanisms and Machines, IMol, Polish Academy of Sciences.  Para modelar cómo las señales inflamatorias influyen en el neurodesarrollo en organismos genéticamente susceptibles, presentamos un protocolo para microinyectar IL-6 en el conducto de Cuvier (vena cardinal común) de larvas de pez cebra, permitiendo la inducción controlada de la inflamación y la evaluación de su impacto en el desarrollo en el contexto del complejo de esclerosis tuberosa (TSC).

Microinyección de interleucina-6 en el torrente sanguíneo de larvas de pez cebra con TSC para estudiar comportamientos similares a trastornos neuropsiquiátricos

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