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	<li>Hattar S, Liao HW, Takao M, Berson DM, Yau KW. Melanopsin-containing retinal ganglion cells: architecture, projections, and intrinsic photosensitivity. Science. 2002;295(5557):1065&#8211;70.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>AAV2-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-mCherry</td><td>Addgene</td><td>44361</td><td>Vector viral dependiente de Cre que codifica el DREADD excitatorio (hM3Dq) fusionado con mCherry para la activación selectiva de ipRGC</td></tr><tr><td>Anti-c-Fos antibody (rabbit monoclonal)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>2250S</td><td>Anticuerpo primario utilizado para detectar c-Fos como marcador de activación neuronal</td></tr><tr><td>Anti-tdTomato antibody (goat)</td><td>LSBio</td><td>LS-C340696</td><td>Anticuerpo primario utilizado para detectar la expresión del reportero mCherry/tdTomato</td></tr><tr><td>Blue LED driver</td><td>Thorlabs</td><td>LEDD1B</td><td>Fuente de alimentación para controlar la intensidad y la salida del LED azul</td></tr><tr><td>Blue LED light source</td><td>Thorlabs</td><td>M470L5</td><td>Fuente LED que emite luz azul (&lambda;max &asymp; 470 nm) para la estimulación fótica</td></tr><tr><td>ClockLab software</td><td>Actimetrics</td><td>Versión 6.0.53</td><td>Software para la adquisición y análisis de datos de actividad locomotora circadiana</td></tr><tr><td>Clozapine-N-oxide (CNO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0832-5MG</td><td>Ligando utilizado para activar los receptores DREADD hM3Dq in vivo</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>62248</td><td>Tinción nuclear fluorescente para etiquetar los núcleos celulares</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>Anticuerpo secundario fluorescente para la detección de anticuerpos primarios de cabra</td></tr><tr><td>Donkey anti-rabbit Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>Anticuerpo secundario fluorescente para la detección de anticuerpos primarios de conejo</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Invitrogen</td><td>00-4958-02</td><td>Medio de montaje utilizado para preservar la fluorescencia en secciones de tejido</td></tr><tr><td>ImageJ (Fiji) software</td><td>NIH</td><td>Versión 2.16.0/1.54g</td><td>Software de código abierto para procesamiento de imágenes y análisis cuantitativo</td></tr><tr><td>Opn4cre Mice</td><td>The Jackson Laboratry</td><td>RRID:IMSR_JAX:035925</td><td>Ratones utilizados para la activación quimiogénetica</td></tr><tr><td>Violet LED driver</td><td>Mightex</td><td>SLA-1000-2</td><td>Fuente de alimentación para controlar la salida del LED violeta</td></tr><tr><td>Violet LED light source</td><td>Mightex</td><td>BLS-LCS-0385-04-22</td><td>Fuente LED que emite luz violeta (&lambda;max &asymp; 385 nm) para la estimulación específica de longitud de onda</td></tr><tr><td>Wild-type mice</td><td>The Jackson Laboratry</td><td>Jackson strain #101043</td><td>Ratones utilizados para el experimento de luz violeta</td></tr></tbody></table>

inducir desplazamientos de fase circadianos diurnos mediante enfoques quimiogenéticos y espectrales

Inducing Daytime Circadian Phase Shifts Using Chemogenetic and Spectral Approaches

Inducir desplazamientos de fase circadianos diurnos mediante enfoques quimiogenéticos y espectrales

In mammals, circadian phase shifting during the daytime is limited by reduced photic responsiveness of the suprachiasmatic nucleus (SCN), restricting the ...

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Research

Investigación

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Neuroscience

Neurociencia

En este artículo se examinarán los métodos que se pueden utilizar para determinar la función circadiana y la sensibilidad de luz en los ratones.

Medición de las respuestas de luz circadianos y aguda en ratones con actividad rueda para correr

Los relojes circadianos funcionar dentro de las células individuales, es decir, son células autónomas. A continuación, se describen los métodos para la generación de células autónomas modelos de reloj de forma no invasiva, luciferasa tiempo real basado en la tecnología de bioluminiscencia. Células Reporter proporcionar sistemas manejables, modelo funcional para el estudio de la biología circadiana.

Monitoreo de células autónomas Ritmos reloj circadiano de expresión génica utilizando luciferase reporteros Bioluminiscencia

Fuente: Kodani, S., et.al. Manipulación optogenética de circuitos neuronales durante el monitoreo de estados de sueño / vigilia en ratones. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la manipulación optogenética de los circuitos neuronales involucrados en la transición del sueño a la vigilia en ratones. El procedimiento consiste en implantar quirúrgicamente una fibra óptica y electrodos en el cerebro y los músculos para permitir la estimulación de la luz y el registro electrofisiológico. Al...

Manipulación optogenética de circuitos neuronales para la transición del sueño a la vigilia en ratones

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Luciferase genéticamente codificado es un popular reportero no invasivo de la expresión génica. Uso de un automatizado luciferase longitudinal imagen optimizada de gas y temperatura grabadora (cocodrilo) permite la grabación longitudinal de células bioluminiscentes bajo una amplia gama de condiciones. Aquí mostramos cómo cocodrilo puede utilizarse en el contexto de la investigación de los ritmos circadianos.

Medida flexible de reporteros bioluminiscentes con un automatizado Luciferase Longitudinal imagen optimizada de Gas y temperatura grabadora (cocodrilo)

Esta nueva tecnología basada en la fluorescencia permite la monitorización a largo plazo de la transcripción de los genes del reloj circadiano en el núcleo supraquiasmático (SCN) de mover libremente ratones en tiempo real y con una alta resolución temporal.

En Vivo Control de la expresión de genes del reloj circadiano en el núcleo supraquiasmático de ratón usando fluorescencia Reporteros

Aquí, presentamos un método para investigar los ritmos diurnos en el rendimiento después de la categorización precisa de los participantes en grupos de fenotipos circadianos basados en el Cuestionario ChronoType de Múnich, biomarcadores de fase circadiana estándar de oro y medidas actigráficas.

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Ensayo Actividad locomotora para el Estudio de los ritmos circadianos y del sueño en los parámetros Drosophila</em

El perfilado de la expresión de ARN en regiones cerebrales discretas del ratón requiere una estrategia precisa y reproducible de recolección de tejido. Aquí se describe un protocolo que utiliza tanto la sección coronal del cerebro como la microdisección asistida por punzón tisular. El rendimiento y la calidad del ARN total obtenido a partir de las muestras resultantes confirman la utilidad del método descrito.

Sin láser y de captura de enfoque de Microscopía de la microdisección de regiones discretas del cerebro del ratón para el aislamiento de ARN total y Downstream secuenciación de próxima generación y de perfiles de expresión génica

National Institute of Mental Health (NIMH), National Institutes of Health (NIH).  Este estudio introduce estrategias quimiogenéticas y basadas en luz violeta para permitir un cambio de fase circadiano fiable durante el día.

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