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</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>BD OptEIA Mouse TNF ELISA Kit</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>560478</td></tr><tr><td>Bodipy 558/568 C12</td><td>Flow cytometry: 1:10000; Staining: 1:2000</td><td>Invitrogen</td><td>D3835</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>3%</td><td>Sigma</td><td>A9647</td></tr><tr><td>CD107a (LAMP1) &ndash; AF647</td><td>Staining: 1:100; Flow cytometry: 1:200</td><td>BioLegend</td><td>121610</td></tr><tr><td>CD11c &ndash; BV605</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>BioLegend</td><td>117334</td></tr><tr><td>CD16/32</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>Invitrogen</td><td>14-0161-82</td></tr><tr><td>CD301 &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:50</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA2392A647</td></tr><tr><td>CD36 &ndash; PE</td><td>Flow cytometry: 1:400</td><td>BioLegend</td><td>102606</td></tr><tr><td>CD45 &ndash; PE</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>BD Pharmingen</td><td>555483</td></tr><tr><td>Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 Flow Cytometry Assay Kit</td><td>EdU: 5 &micro;M</td><td>Invitrogen</td><td>C10632</td></tr><tr><td>Clodronate Liposomes</td><td>500 &micro;g/ml clodronate</td><td>Liposoma</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 2</td><td>1 mg/ml, 315 U/mg</td><td>Worthington</td><td>LS004176</td></tr><tr><td>CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay Kit</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>C20301</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Flow cytometry: 0.2 &micro;g/ml</td><td>Thermo Fisher</td><td>62248</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>70%</td><td>Carl Roth</td><td>T913.1</td></tr><tr><td>F4/80 &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>Invitrogen</td><td>MF48021</td></tr><tr><td>F4/80 &ndash; PE-Cy7</td><td>Flow cytometry: 1:200</td><td>Invitrogen</td><td>25-4801-82</td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>1.10</td><td>Gibco</td><td>10270106</td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>1.20</td><td>Gibco</td><td>10270106</td></tr><tr><td>HBSS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14170138</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>13 mM</td><td>Roth</td><td>HN77.2</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>1:10,000</td><td>Life Technologies</td><td>H3570</td></tr><tr><td>LysoTracker &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:20000; Staining: 1:10000</td><td>Invitrogen</td><td>H34477</td></tr><tr><td>MAC-2</td><td>Staining: 1:1000</td><td>Cedarlane</td><td>CL8942AP</td></tr><tr><td>Millicell Cell Culture Insert, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &micro;m</td><td></td><td>Merck Millipore</td><td>PICM0RG50</td></tr><tr><td>PBS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14190169</td></tr><tr><td>PBS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14190169</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)</td><td>0.111111111</td><td>Gibco</td><td>11548876</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)</td><td>0.111111111</td><td>Gibco</td><td>11548876</td></tr><tr><td>Perilipin</td><td>2 &micro;g/ml</td><td>Abcam</td><td>ab3526</td></tr><tr><td>Plexxicon 5622</td><td>40 &micro;M</td><td>Plexxicon Inc.</td><td>HY-114153</td></tr><tr><td>RPMI-Media 1640</td><td>with 11 mM glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R8758</td></tr><tr><td>RPMI-Media 1640</td><td></td><td>Sigma</td><td>R8758</td></tr><tr><td>TC-Insert for 6-well plates</td><td></td><td>Sarstedt</td><td>83.3930.040</td></tr><tr><td>TPP tissue culture test plate 6</td><td></td><td>TPP</td><td>92006</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>1%</td><td>Carl Roth</td><td>3051.2</td></tr><tr><td>Zinc chloride</td><td>0.8 mM</td><td>Sigma</td><td>Z0152</td></tr><tr><td>Zinc formaline</td><td></td><td>Polyscience</td><td>21516-3.75</td></tr></tbody></table>
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un modelo ratón ex vivo para inflamación del tejido adiposo con una dieta alta en grasas

An ex vivo Mouse Model for High-Fat Diet-Like Adipose Tissue Inflammation

Un modelo ratón ex vivo para inflamación del tejido adiposo con una dieta alta en grasas

This protocol describes an ex vivo mouse model that recapitulates selected cellular and inflammatory features observed in visceral adipose tissue (VAT) ...

We are investigating inflammation in adipose tissue, focusing on the role of adipose tissue macrophages in this process. This model can be applied in a great variety of adipose tissue inflammation research where the focus is on the adipose tissue itself. To begin, prepare the culture medium under sterile conditions.Warm the culture medium and sterile PBS to 37 degrees Celsius. Clean all equipment and the work area inside the tissue culture hood with 70%ethanol. After placing the sacrificed animal in a glass beaker containing 70%ethanol, wipe the exterior of the glass beaker with ethanol and transfer it into the tissue culture hood.Using blunt forceps, place the mouse in a supine position, and pin it to a dissection board. Then, add a thin layer of pre-warmed PBS to a Petri dish. Change to a fresh pair of gloves.Using forceps, lift the lower abdominal skin, and make a small horizontal incision using scissors to open the abdominal cavity. Make a vertical incision extending from the initial cut to expose the internal organs. For male mice, carefully lift the gonadal fat pad, which is attached to the epididymis and testis.Make a cut above the epididymis. Alternatively, excise the epidi

an-ex-vivo-mouse-model-for-high-fat-diet-like-adipose-tissue

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

El tejido adiposo (AT) es un sitio de activación de células inmunes y la interacción intensa. Casi todas las células del sistema inmune están presentes en AT y sus proporciones se alteran por la obesidad. Aislamiento adecuado, cuantificación y caracterización de las poblaciones de células inmunes son fundamentales para la comprensión de su papel en la enfermedad immunometabolic.

Aislamiento de tejido adiposo células inmunes

El tejido adiposo (AT) puede influir en la homeostasis de todo el cuerpo, por lo tanto, es importante comprender los mecanismos moleculares de la diferenciación y función de los adipocitos. Proporcionamos un protocolo para obtener nuevos conocimientos sobre estos procesos mediante el análisis de la homeostasis, la diferenciación y la exposición a la hipoxia de los adipocitos como modelo para la apoptosis inducida de los adipocitos.

Mecanismo de regulación de los números de adipocitos en los organismos adultos a través de diferenciación y apoptosis La homeostasis

Se describe un modelo animal simple y confiable para la esteatohepatitis no alcohólica inducida por la dieta, que se logra a través de la carcasa no SPF de los animales y la administración de una dieta alta en grasas específica. Describimos la identificación de los subconjuntos de células inmunes hepáticas y adiposas para recapitular las condiciones inmunológicas humanas exponiendo ratones a gérmenes ambientales.

Un modelo murino avanzado para esteatohepatitis no alcohólica en asociación con diabetes tipo 2

Describimos un sistema de cultivo in vitro de matriz-adipocitos extracelulares humanos 3D que permite la disección de las funciones de la matriz y los adipocitos en contribuir al fenotipo metabólico del tejido adiposo.

Un modelo de cultivo de matriz-adipocitos extracelulares 3D humano para el estudio de la conversación cruzada metabólica Matrix-Cell

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Este protocolo describe el aislamiento de preadipocitos de ratón de la grasa subcutánea, su diferenciación en adipocitos maduros y la inducción de resistencia a la insulina. La acción de la insulina se evalúa mediante la fosforilación/activación de los miembros de la vía de señalización de la insulina a través del western blot. Este método permite la determinación directa de la resistencia/sensibilidad a la insulina en adipocitos primarios.

Adipocitos diferenciados de ratón en cultivo primario: un modelo de resistencia a la insulina

La lipólisis de triglicéridos en los adipocitos es un proceso metabólico importante que resulta en la liberación de ácidos grasos libres y glicerol. Aquí, proporcionamos un protocolo detallado para medir la lipólisis basal y estimulada en adipocitos y tejido adiposo ex vivo de ratones.

Medición de la tasa de lipólisis en tejido adiposo murino ex vivo y preadipocitos primarios diferenciados in vitro

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

Este protocolo presenta un enfoque detallado para replicar un modelo murino de insuficiencia cardíaca inducida por hiperlipidemia con fracción de eyección preservada (HFpEF). El diseño combina la administración de virus adenoasociado al virus 9-troponina T de baja densidad con receptor de lipoproteínas de baja densidad (AAV9-cTnT-LDLR) y poloxámero-407 (P-407).

Un modelo murino de insuficiencia cardíaca inducida por hiperlipidemia con fracción de eyección preservada

Huevos de Schistosoma mansoni son potentes estimuladores del tipo T helper 2 (Th2) la respuesta inmune, característico de la infección por el parásito, el asma y la inflamación alérgica. Este protocolo utiliza S. mansoni de inyección de huevos para generar un recuento de CD4 Th2 citoquinas inducida por la respuesta inflamatoria en el pulmón, caracterizada por la formación de un granuloma pulmonar alrededor del huevo, la eosinofilia y la activación de los macrófagos alternativa.

Con óvulos de<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Como un<em&gt; En vivo</em&gt; Modelo de la inflamación pulmonar inducida por helmintos

Leipzig University.  Utilizando un modelo explantado ex vivo , se cultivan pequeños fragmentos de la porción rostral del tejido adiposo visceral blanco de ratones magros durante 7–10 días, lo que permite inducir y estudiar la inflamación del tejido adiposo a medida que ocurre durante la alimentación rica en grasas.

Un modelo ratón ex vivo para inflamación del tejido adiposo con una dieta alta en grasas

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