Name: Principios de la recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Aprende los principios de la tecnología de recombinasa específica de sitio (RSS) y el sistema Cre/lox para ingeniería genómica avanzada. Este método permite la mutagénesis condicional con mayor precisión que las estrategias tradicionales.

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principios de la recombinasa específica de sitio (rss) tecnología

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Recombinasa específica de sitio (RSS) permite la manipulación de la estructura de los genes para explorar la función del gen y se ha convertido en una herramienta integral de la biología molecular. Específicas del lugar recombinaciones son proteínas que se unen a distintas secuencias de ADN diana. El sistema Cre / lox fue descrita por primera vez en los bacteriófagos en la década de 1980. Recombinasa Cre es un tipo de topoisomerasa I que cataliza la recombinación sitio-específica de ADN entre dos loxP (lugar de la X-over P1) sitios. El sistema Cre / lox no requiere cofactores. Secuencias LoxP contienen distintos sitios de unión para recombinasas Cre que rodean a una secuencia central de dirección en la recombinación y la reorganización se lleva a cabo. Cuando las células contienen sitios loxP y expresan la recombinasa Cre, un evento de recombinación ocurre. ADN de doble cadena se corta en ambos sitios loxP por la recombinasa Cre, reorganizado, y se liga (&quot;tijeras y pegamento&quot;). Productos del acontecimiento de recombinación depende de la orientación relativa de las secuencias asimétricas. La tecnología RSS se utiliza con frecuencia como una herramienta para explorar la función del gen. Aquí, el gen de interés está flanqueado por sitios loxP Cre objetivo (&quot;floxed&quot;). Los animales se cruzó con los animales que expresan la recombinasa Cre bajo el control de un promotor tejido-específica. En los tejidos que expresan la recombinasa Cre se une a secuencias diana y los impuestos especiales del gen floxed. Deleción del gen controlado permite la investigación de la función de genes en tejidos específicos y en momentos distintos. Análisis de la función génica empleando la tecnología SSR --- mutagénesis condicional - tiene importantes ventajas sobre los tradicionales knock-out en la deleción del gen es frecuentemente letal.

El advenimiento de la recombinasa específica de sitio (SSR) la tecnología y el sistema Cre / lox ha dado lugar a numerosos avances en biología molecular, y ha demostrado ser una valiosa herramienta para la evaluación de la función génica en animales transgénicos. Esta entrevista analiza el mecanismo de recombinación sitio específico por ciclación recombinasa (CRE) y cómo el uso de esta enzima ha llevado al desarrollo de mutagénesis condicional, la cual tiene ventajas significativas sobre las estrategias tradicionales de golpe.

Principios de la recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología

La tecnología de recombinasas sitio-específicas (SSR) permite la manipulación de la estructura génica para explorar la función de los genes y se ha convertido en una herramienta integral de la biología molecular...

Hola, me llamo Frank Buchholz. Soy jefe de grupo en el Instituto Max PL de Biología Celular y Genética Molecular. Y nuestro trabajo se mantiene.Tenemos dos aspectos en nuestro trabajo. Uno se centra en la selección de ARN I. El otro se enfoca en el desarrollo de recombinasas específicas de sitio para la ingeniería genómica avanzada.Mi formación es la de biólogo, biólogo molecular, y estudié genética en biología. Posteriormente realicé un doctorado en los Laboratorios Europeos de Biología Molecular en Heidelberg, y luego hice una estancia posdoctoral en San Francisco en la UCSF con Mike Bishop, trabajando en modelos animales de leucemia. El Instituto Max Puncture aquí en Dresde intenta combinar, digamos, al menos dos aspectos diferentes, que son biólogos del desarrollo y biólogos celulares, dentro del intento fundamentalmente de, creo que se podría decir, que su tema básico, básico, es tratar de comprender cómo las células forman tejidos.Este es básicamente el objetivo general del instituto aquí en Ston. Así que trabajamos en dos campos principalmente. Un campo consiste en realizar cribados por ARNip, intentando identificar funciones novedosas de genes previamente no caracterizados

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Investigación

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Biology

Biología

Actual del VIH-1 estrategias de actuar para suprimir el ciclo de vida del virus, pero no efectiva erradicación de la infección. Aquí, se demuestra que una recombinasa diseñado de manera eficiente los impuestos especiales integrados de VIH-1 proviral del ADN del genoma de las células infectadas.

Entrevista: El VIH-1 La escisión del ADN proviral uso de una recombinasa evolucionado

La proteína nucleoide mitocondrial de levadura, Mgm101, es una proteína de recombinación de tipo Rad52 que forma grandes anillos de oligómeros. Un protocolo se describe la preparación Mgm101 recombinante soluble usando la proteína de unión a maltosa (MBP)-etiquetado estrategia junto con intercambio catiónico y cromatografía de exclusión por tamaño.

Preparación de la proteína de recombinación Mgm101 por Estrategia de etiquetas MBP basado

Las metodologías de selección de genes se pueden utilizar para generar ratones transgénicos con alelos knockout, knock-in y marcados.  Aquí, describimos un método mejorado de recombinación en E. coli, que denominamos 'subclonación más inserción', que se puede utilizar para generar rápidamente vectores de orientación génica personalizados.

Subclonación Plus Inserción (SPI) - Un nuevo método recombinería para la rápida construcción de la orientación de genes Vectores

El minivector de ADN lineal covalentemente cerrado (LCC) (DNA ministring) es un vector de entrega de genes no viral que ofrece una alta eficiencia de transfección y es relevante para cualquier aplicación de entrega de ADN. El sistema de producción es sencillo, rápido y escalable in vivo. El siguiente protocolo proporciona instrucciones visuales paso a paso para la producción de minicadenas de ADN.

Producción de ADN de doble cadena Ministrings

Aquí se presenta un método de edición gen rápida y eficiente basado en RMCE en el locus de AAVS1 humanas pluripotentes células madre (hPSCs) que mejora los sistemas anteriormente descritos. Usando esta técnica, líneas isogénicas se pueden generar rápida y fiable para los estudios comparativos adecuados, facilitar la investigación transgénesis mediada con hPSCs.

Generación rápida y eficiente de las células madre pluripotentes recombinante humana mediada por la recombinasa Cambio en el cassette<em&gt; AAVS1</em&gt; Locus

Aquí, presentamos un protocolo detallado para la identificación de eventos de recombinación homóloga que se produjeron en células madre embrionarias del ratón mediante Southern blot o PCR. Este método es ejemplificado por la generación de modelos UROLOGICAL miosina II reemplazo genético ratón tecnología tradicional embrionario basada en células madre homólogo mediada por la recombinación dirigida a.

Identificación de eventos de recombinación homóloga en células madre embrionarias del ratón mediante Southern blot y reacción en cadena de polimerasa

Las endonucleasas de restricción con nueva especificidad de secuencia se pueden desarrollar a partir de enzimas que reconocen una secuencia parcialmente degenerada. Aquí proporcionamos un protocolo detallado que utilizamos con éxito para alterar la especificidad de la secuencia de la enzima NlaIV. Los ingredientes clave del protocolo son la compartimentación in vitro de la reacción de transcripción/traducción y la selección de variantes con nuevas especificidades de secuencia.

In Vitro dirigió la evolución de una endonucleasa de restricción con una especificidad más estricta

La Biotinilación Mejorada por Iluminación Restringida por Localización específica (ALIBi) es un método novedoso activado optogenéticamente desarrollado para marcar y purificar afinidad poblaciones subcelulares de ribosomas para secuenciación posterior y análisis proteómico.

Aislamiento de subpoblaciones subcelulares de ribosomas basadas en biotinilación potenciada por iluminación restringida por etiquetas péptidas específicas de péptidos recombinantes

Aquí se presenta la generación de Tre recombinasa a través de las instrucciones, la evolución molecular. Tre recombinasa reconoce una secuencia de destino predefinido dentro de las secuencias LTR del provirus VIH-1, dando lugar a la escisión y la erradicación de la provirus de las células humanas infectadas. Aunque todavía en sus inicios, la evolución molecular dirigida a permitir la creación de enzimas personalizados que servirán de instrumentos de cirugía molecular y la medicina molecular.

Evolución molecular de la recombinasa Tre

Antes de intentar la cirugía, un nuevo cirujano debería tener una formación básica en las técnicas quirúrgicas y los conceptos. Este artículo presenta consideraciones básicas quirúrgica con énfasis en los roedores.

Principios de la cirugía de roedores para el cirujano de Nueva

Aprende los principios de la tecnología de recombinasa específica de sitio (RSS) y el sistema Cre/lox para ingeniería genómica avanzada. Este método permite la mutagénesis condicional con mayor precisión que las estrategias tradicionales.

Principios de la recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología

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