Name: Un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Aprende a generar organoides mamarios humanos tridimensionales usando un hidrogel definido con colágeno, laminina y fibronectina. Este método recapitula la morfogénesis mamaria y permite estudiar la plasticidad epitelial y eventos tempranos en carcinogénesis.

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<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Tubos estériles para procesamiento de tejido y centrifugación</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Dispositivo de filtración para la preparación de suspensión de células individuales</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer for low volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Dispositivo de filtración para la preparación de suspensión de células individuales</td></tr><tr><td>Automated cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Dispositivo utilizado para contar células y determinar la viabilidad</td></tr><tr><td>Bovine pituitary extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Suplemento para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Diapositivas de doble cámara utilizadas para contar células</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Se necesitan centrifugadoras de mesa/s con capacidad de velocidad de al menos 500 x g y capacidad para tubos de 15 mL y 1,5 mL. </td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Proteína de matriz extracelular utilizada para la formación de hidrogel</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzima utilizada para la disociación de tejidos</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Viales estériles para almacenamiento criogénico de muestras</td></tr><tr><td>Culture vessels (e.g., chamber slides, multiwell plates)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Platos para la deposición de hidrogel y cultivo de organoides.</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Crioprotector utilizado en medio de congelación</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzima utilizada para la disociación secundaria de tejidos</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzima utilizada durante la disociación celular.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Suplemento de suero utilizado en medios de lavado y neutralización</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Componente de proteína de matriz extracelular</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Suplemento para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Suplemento para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Suplemento para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Hyaluronic acid</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Componente de matriz extracelular para la formulación de hidrogel</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzima utilizada para la disociación de tejidos</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Dispositivo utilizado para la incubación de cultivos de tejidos</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Suplemento para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Componente de proteína de matriz extracelular</td></tr><tr><td>Mammary epithelial basal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Medio de crecimiento para células epiteliales</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Tubos utilizados para reacciones de pequeño volumen</td></tr><tr><td>Orbital rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotador utilizado para la dispersión de tejidos durante la disociación enzimática</td></tr><tr><td>P1000 pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Dispositivo utilizado para mezclar y transferir volúmenes de hasta 1,000 &mu;L</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Suplemento antibiótico para medio de células epiteliales</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Solución tampón utilizada para lavado y enjuague</td></tr><tr><td>Precision balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Balanza utilizada para pesaje de tejidos</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipeta utilizada para la recolección de células epiteliales no adherentes</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Reactivo utilizado para la neutralización de colágeno</td></tr><tr><td>Sterile scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Herramientas utilizadas para el picado mecánico de tejidos</td></tr><tr><td>Trypan blue solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Tinte utilizado para la evaluación de la viabilidad celular</td></tr><tr><td>Trypsin (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Reactivo enzimático utilizado para la disociación celular</td></tr><tr><td>Water bath (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Dispositivo utilizado para la descongelación controlada de muestras</td></tr></tbody></table>

un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Nuestra investigación se centra en el desarrollo mamario humano y la lactancia, la organización del tejido, las exposiciones ambientales y los factores genéticos que conducen a cambios biológicos en el cáncer. Los modelos existentes no representan con precisión la arquitectura del tejido mamario humano, el momento del desarrollo ni el microambiente. Este protocolo establece un puente entre los modelos en 2D y los modelos animales dentro de un sistema humano.Obtenga tejido mamario humano digerido criopreservado durante al menos 24 horas. Sumerja inmediatamente el vial criogénico hasta la tapa en un baño de agua a 37 grados Celsius y descongele rápidamente durante un minuto para minimizar la muerte celular. Una vez descongelado completamente, transfiera el contenido del vial criogénico a un tubo cónico de 15 mililitros que contenga 10 mililitros de medio de crecimiento para epitelio mamario, o MEGM, y centrifugue a 250g durante cinco minutos.Después de desechar el sobrenadante, re-suspenda el sedimento en 500 microlitros de solución enzimática de disociación precalentada a 37 grados Celsius que contenga tripsina al 0,25%. Transfiera la suspensión a un tubo microcentrífugo de 1,5 mili

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Describimos un modelo de cultivo en 3D del epitelio mamario humano que es adecuado para estudiar la acción de las hormonas.

Un 3D Cultura Modelo sensibles a hormonas de la glándula mamaria humana epitelio

Este manuscrito describe una técnica basada en litografía suave para diseñar matrices uniformes de tres dimensiones (3D) los tejidos epiteliales de la geometría definida rodeadas por matriz extracelular. Este método es susceptible de una amplia variedad de tipos de células y contextos experimentales y permite la selección de alto rendimiento de repeticiones idénticas.

Ingeniería tridimensionales epiteliales tejidos embebidos dentro de la matriz extracelular

Los organoides desarrollados a partir de glándulas mamarias de ratones fueron irradiados y caracterizados para evaluar rasgos epiteliales e interacciones con las células inmunitarias. Los organoides irradiados se pueden utilizar para evaluar mejor las interacciones de células celulares que pueden conducir al reclutamiento de células tumorales en tejido normal irradiado.

Crecimiento y caracterización de organoides irradiados de glándulas mamarias

Se presenta un protocolo para generar organoides endometriales primarios humanos que consisten en células epiteliales y estromales y retienen las características del tejido endometrial nativo. Este protocolo describe los métodos desde la adquisición de tejido uterino hasta el procesamiento histológico de organoides endometriales.

Generación de organoides endometriales primarios humanos multicelulares

La glándula mamaria es una estructura bicapa, que comprende células epiteliales mioepiteliales externas e internas. Presentado es un protocolo para preparar organoides utilizando la trippsinización diferencial. Este método eficiente permite a los investigadores manipular por separado estos dos tipos de células para explorar preguntas sobre sus funciones en la forma y función de la glándula mamaria.

Generación de organoides mamarios de mosaico por trippsinización diferencial

El objetivo de este protocolo es bioimprimir directamente las células epiteliales mamarias como esferoides multicelulares en redes endoteliales preformadas para crear rápidamente modelos de co-cultivo endotelial mamario 3D que pueden ser utilizados para estudios de detección de fármacos.

Bioimpresión directa de esferoides multicelulares de mama 3D en redes endoteliales

El objetivo de este protocolo es explicar y demostrar el desarrollo de un modelo microfluídico tridimensional (3D) de tejido cardíaco humano altamente alineado, compuesto por cardiomiocitos derivados de células madre co-cultivados con fibroblastos cardíacos (CF) dentro de un hidrogel biomimético a base de colágeno, para aplicaciones en ingeniería de tejido cardíaco, detección de fármacos y modelado de enfermedades.

Desarrollo de tejido cardíaco humano organizado en 3D dentro de una plataforma microfluídica

Este protocolo discute un enfoque para generar organoides epiteliales a partir de tejido mamario primario normal y tumoral a través de centrifugación diferencial. Además, se incluyen instrucciones para el cultivo tridimensional, así como imágenes inmunofluorescentes de organoides incrustados.

Generación y obtención de imágenes de organoides epiteliales humanos y de ratón a partir de tejido mamario normal y tumoral sin pasar

Aquí, describimos un protocolo para la formación de organoides de timo derivados de iPSC humanos cultivados en hidrogeles de fibrina 3D con el objetivo de apoyar la maduración y el mantenimiento prolongado de las células epiteliales tímicas (TEC), así como la timopoiesis in vitro.

Formación de organoides de timo humano en hidrogeles de fibrina tridimensionales

Existe una necesidad crítica de modelos de cáncer en 3D que capturen la diafonía heterocelular para estudiar la metástasis del cáncer. Nuestro estudio presenta la generación de estromas-epiteliales heteromulticelulares en un entorno de andamios y libres de andamios que pueden ser utilizados para estudiar la invasión y las distribuciones espaciales celulares.

Células estromales heteromulticelulares en cultivos 3D sin andamios de células de cáncer epitelial para impulsar la invasión

Aprende a generar organoides mamarios humanos tridimensionales usando un hidrogel definido con colágeno, laminina y fibronectina. Este método recapitula la morfogénesis mamaria y permite estudiar la plasticidad epitelial y eventos tempranos en carcinogénesis.

Un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria (Video) | JoVE Journal

Un método definido basado en hidrogel para generar organoides mamarios humanos tridimensionales que recapitulan la morfogénesis mamaria

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