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	<li>Vogel, J. W. et al. Spread of pathological tau proteins through communicating neurons in human Alzheimer&#8217;s disease. Nat Commun 11, 2612 (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Thermo Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-268</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, Phenol Red-free, LDEV-free</td><td>Corning</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Thermo Scientific</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>Doxyciclina</td><td>Clontech</td><td>631311</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-190-250</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Software de gráficos</td><td>GraphPad Prism (o similar)</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Human GM-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut DMEM</td><td>Thermo Scientific</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Luminescent Plate Reader</td><td>SpectraMax i3x (o similar) - Molecular Devices</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-002</td><td></td></tr><tr><td>Microplate, 96 Well, PS, Half-area, White</td><td>Greiner</td><td>675075</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Nano-Glo HiBiT Lytic Detection System</td><td>Promega</td><td>N3030</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine hydrobromide&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN15017750</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human IL-34</td><td>Thermo Scientific</td><td>200-34</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human M-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human TGF-&beta;1</td><td>Thermo Scientific</td><td>100-21C</td><td></td></tr><tr><td>Surface Treated Sterile Tissue Culture Plates</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>Tau-HiBiT protein</td><td>In house</td><td>n/a</td><td>Proteína Tau con una etiqueta de péptido VSGWRLFKKIS</td></tr><tr><td>Trypsin Inhibitor</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9128</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Thermo Scientific</td><td>5-200-072</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dihydrochloride</td><td>Bio-techne</td><td>1254</td><td></td></tr></tbody></table>

un ensayo de complementación con luciferasa dividida para la medición temporalmente resuelta de la eliminación de tau en microglía

A Split-Luciferase Complementation Assay for Temporally Resolved Measurement of Tau Clearance in Microglia

Un ensayo de complementación con luciferasa dividida para la medición temporalmente resuelta de la eliminación de tau en microglía

As the resident immune cells of the central nervous system, microglia are central regulators of brain homeostasis and key mediators of neurodegenerative ...

a-split-luciferase-complementation-assay-for-temporally-resolved

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

El video muestra un ensayo de citometría de flujo de transferencia de energía por resonancia fluorescente (FRET) para detectar la actividad de siembra de agregados de proteínas aislados de muestras biológicas. Las células de mamíferos que expresan proteínas reporteras tau se incuban con complejos de transducción de liposomas que contienen semillas de tau. Estas semillas median la agregación de las proteínas reporteras, lo que lleva a generar una señal positiva FRET en el citómetro de flujo.

Una técnica de citometría de flujo FRET para detectar la agregación de proteínas reporteras inducida por semillas de tau

Este video muestra un ensayo basado en células que cuantifica la absorción de Tau por parte de la microglía murina utilizando agregados de Tau marcados con fluorescencia sensibles al pH, analizados a través de la clasificación de células activadas por fluorescencia para una evaluación cuantitativa.

Un ensayo basado en células para evaluar la absorción de la proteína Tau por la microglía

La transferencia de célula a célula de agregados de proteínas, o semillas proteopáticas, puede ser la base de la progresión de la patología en las enfermedades neurodegenerativas. Aquí, se describe un nuevo ensayo de citometría de flujo FRET que permite la detección específica y sensible de la actividad de siembra a partir de muestras recombinantes o biológicas.

Detección Sensible de Proteopathic Siembra Actividad con FRET Citometría de Flujo

A continuación, describimos la configuración, software de navegación, y el análisis de datos de un método espacial y temporalmente precisa de medir tónico y cambios extracelulares de glutamato fásicas in vivo usando matrices de microelectrodos ligados a enzimas (MEA).

El uso de biosensores basados ​​en enzimas para medir tónica y fásica glutamato en modelos de ratones con Alzheimer

Hemos generado con éxito dos ensayos de sustrato específico γ-secretasa. Ambos ensayos celulares presentados aquí están diseñados para cuantificar las actividades enzimáticas de la γ-secretasa a través de la salida de los reporteros de luciferasa de luciérnaga.

Para la medición cuantitativa de la proteína precursora del amiloide mediada por γ-secretasa y muesca hendidura en plataformas de ensayo reportero luciferasa basadas en células

Aquí describimos un ensayo basado en células para evaluar cuantitativamente la absorción tau por microglia con el objetivo de crear una herramienta de investigación para caracterizar mejor los mecanismos de acción de los anticuerpos anti-tau.

Ensayo basado en células para estudiar despacho Tau anticuerpo-mediada por la microglía

Este protocolo detalla un procedimiento en el que las culturas neuronales humanas son transducidas con construcciones lentivirales codificando para tau humano mutante. Las culturas transducadas muestran agregados Tau y patologías asociadas.

Un modelo in vitro para estudiar la agregación de Tau utilizando la transducción de neuronas humanas mediada por lentivirales

El tau es una proteína neuronal presente tanto en el citoplasma, donde se une a los microtúbulos, como en el núcleo, donde ejerce funciones no convencionales, incluida la modulación de genes relacionados con la enfermedad de Alzheimer. Aquí, describimos un método para investigar la función de Tau nuclear excluyendo cualquier interferencia proveniente de Tau citoplasma.

Modulación de la localización subcelular Tau como herramienta para investigar la expresión de genes relacionados con enfermedades

Aquí, demostramos cómo combinar la transfección de neuronas primarias de roedores del hipocampo con imágenes confocales de células vivas para analizar los efectos patológicos inducidos por proteínas en el transporte axonal e identificar las vías mecanicistas que median estos efectos.

Uso de imágenes de células vivas para medir los efectos de las proteínas patológicas en el transporte axonal en las neuronas primarias del hipocampo

Este artículo demuestra un método para visualizar y cuantificar la motilidad y el contacto de la microglía con puntos postsinápticos en la retina mediante microscopía confocal de disco giratorio.

Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

University of Massachusetts Amherst.  Describimos una plataforma cuantitativa sensible y resuelta en el tiempo para medir la eliminación de la tau extracelular en microglía derivada de células madre pluripotentes inducidas humanas (iPSC) utilizando un sistema de luminiscencia basado en microplacas. Este enfoque permite la detección sensible de la cinética de degradación de tau en formato micropozo, lo que permite una interrogación de alto rendimiento del manejo de tau ...

Un ensayo de complementación con luciferasa dividida para la medición temporalmente resuelta de la eliminación de tau en microglía

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