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<table><tbody><tr><td>Artificial saliva</td><td>Solarbio, China</td><td>A7990</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>5000006</td><td>Para el ensayo de Bradford</td></tr><tr><td>Coomassie blue</td><td>Abcam, UK</td><td>ab119211</td><td>Para la visualización de bandas de proteínas</td></tr><tr><td>Cortisol ELISA Kit</td><td>Abcam, UK</td><td>ab154996</td><td></td></tr><tr><td>Cortisol LFA</td><td>In-house</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>Daihan Scientific, República de Corea)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone (Cortisol)</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>PHR1014</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli sample buffer</td><td>GenDEPOT, USA</td><td>L1200-001</td><td>Para la denaturación de proteínas antes de SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Membrane holder</td><td>GVS Filter Technology</td><td>1220950</td><td>Soporte de 13 mm de diámetro</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN&reg; Tetra Cell for 0.75 mm Gels</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1658000</td><td>Para la electroforesis en gel</td></tr><tr><td>Mucin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 spectrophotometer</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td></td><td>Para el ensayo de proteínas</td></tr><tr><td>PES membranes</td><td>STERLITECH, USA</td><td>PES00313100</td><td>PES de 0,03 micras, membrana de 13 mm</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>DUKSAN, República de Corea</td><td>LB004</td><td></td></tr><tr><td>Pooled Human Saliva</td><td>Innovative Research Inc., USA</td><td>IRHUSL5ML</td><td></td></tr><tr><td>RBCM</td><td>In-house</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Resolving Gel Buffer for PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610798</td><td>Para la preparación del gel de resolución</td></tr><tr><td>Salivette Cortisol</td><td>SARSTEDT, Alemania</td><td>51.1534.500</td><td>Kit de recolección de saliva</td></tr><tr><td>Stacking Gel Buffer for PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610799</td><td>Para la preparación del gel de apilamiento</td></tr><tr><td>Super&bull;SAL&trade;</td><td>Oasis Diagnostics, USA</td><td>SSAL-601</td><td>Kit de recolección de saliva</td></tr><tr><td>Syringe</td><td>koreavaccine, República de Corea)</td><td></td><td>1 mL de volumen</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610800</td><td>Para la polimerización de acrilamida</td></tr></tbody></table>

dispositivo portátil para el pretratamiento de la saliva para mejorar la detección del cortisol

Handheld Device for Saliva Pretreatment to Improve Cortisol Detection

Dispositivo portátil para el pretratamiento de la saliva para mejorar la detección del cortisol

Salivary cortisol detection offers a noninvasive alternative to blood-based analysis. However, its practical implementation remains limited by the ...

Nuestra investigación se centra en el pretratamiento de la saliva para mejorar la fiabilidad de la detección de cortisol. Este protocolo puede aplicarse al análisis de biomarcadores basado en saliva utilizando el ensayo de inmunocromatografía. Para comenzar, mezcle suavemente la muestra de saliva humana agrupada y desidentificada obtenida comercialmente antes de su uso, para asegurar una homogeneidad adecuada.Almacene las muestras de saliva a cuatro grados Celsius y úselas dentro del período de almacenamiento recomendado por el proveedor. Derrita el pellet de membrana de glóbulos rojos de color rosa pálido o RBCM preparado y almacenado a 80 grados Celsius según un protocolo estándar. Prepare una membrana de poliéter sulfona o PES con un tamaño de poro de 30 nanómetros y un diámetro de 13 milímetros.Deposite 100 microlitros de una solución de GRBC al 2% peso por volumen sobre un lado de la membrana de PES. Extienda o administre la solución gota a gota suavemente hasta que toda la superficie de la membrana esté completamente humedecida. Incube la membrana a 50 grados Celsius durante 30 minutos para asegurar un recubrimiento y secado uniformes.Almacene la membrana recubierta a temperatura ambiente y úsela dentro de los 15 días posteriores a su preparación. Para fabricar el dispositivo SaliFilter, coloque la membrana de PES recubierta con RBCM en el soporte de filtro designado. Arme el dispositivo conectando firmemente los componentes de entrada y salida.Conecte una jeringa de un mililitro a la entrada del dispositivo. Cargue 500 microlitros de saliva en la jeringa conectada al dispositivo SaliFilter. Aplique presión manual suave para hacer pasar la muestra de saliva a través de la membrana durante aproximadamente dos minutos.Recolecte la saliva pretratada de la salida y úsela inmediatamente o almacénela a cuatro grados Celsius hasta su posterior análisis. Después de la detección de proteínas mediante SDS-PAGE, aplique 150 microlitros de saliva pretratada en la almohadilla de muestra de la tira LFA para la detección de cortisol. Permita que la muestra migre a lo largo de la tira durante 10 minutos.Capture imágenes de los resultados de la prueba utilizando un teléfono inteligente o un sistema de imagen. Arrastre y suelte el archivo LFA capturado en la ventana del software ImageJ. Haga clic en la imagen, elija color y luego seleccione dividir canales para separar los canales rojo, verde y azul.Cierre los canales rojo y azul y utilice la imagen del canal verde para el análisis de intensidad de la línea de prueba. Utilice la herramienta de rectángulo para seleccionar la región de interés o ROI de 100 por 10 píxeles que cubra la línea de prueba. Abra las demás imágenes de las tiras de LFA y aplique el mismo tamaño de ROI en todas las muestras.Haga clic en analizar y elija medir para obtener el valor medio de intensidad de la región de interés (ROI) de la línea de prueba. A continuación, seleccione una región adyacente de la membrana vacía con el mismo tamaño de ROI y mida la intensidad de fondo. Exporte los valores a una hoja de cálculo de Excel y calcule la intensidad normalizada de la línea de prueba restando la intensidad de fondo de la intensidad de la línea de prueba.La evaluación de la capacidad de filtración del SaliFilter, mediante la comparación de los cambios en la turbidez frente a kits comerciales de recolección de saliva, mostró una alta turbidez en la saliva no tratada, mientras que las muestras tratadas con el SaliFilter aparecieron claramente transparentes. Las muestras procesadas utilizando kits comerciales mostraron solo una mejora limitada en la claridad. La cuantificación de proteínas salivales mediante absorbancia a 280 nanómetros mostró una reducción aproximada del 69 % tras la filtración.Un ensayo de Bradford mostró una disminución notable en la intensidad del color en las muestras tratadas con SaliFilter, lo que correspondió a una reducción aproximada del 80 % en la concentración total de proteína. El análisis de flujo capilar demostró que la eliminación de las mucinas restauró el rendimiento del flujo en la saliva pretratada. El análisis mediante SDS-PAGE confirmó que las mucinas se retuvieron aguas arriba de la membrana y estaban ausentes en las muestras procesadas.Este protocolo permite a los investigadores evaluar el cortisol soluble después de eliminar proteínas y mucinas. Tras la filtración, las muestras pueden analizarse mediante SDS-PAGE, ensayos de proteínas, ELISA u otros. Estudios futuros pueden validar esta plataforma utilizando muestras clínicas de saliva con diferentes concentraciones de cortisol.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Demostramos que: (1) procedimientos para la recolección de muestras de saliva en adultos mayores con deterioro cognitivo por parte de cuidadores familiares en el hogar, (2) procedimientos para medir la actividad del estrés a través del cortisol salival y la alfa amilasa, y (3) perfiles representativos. Los protocolos que permiten a los investigadores estudiar los procesos relacionados con el estrés avanzan en nuestra comprensión de la sensibilidad y la susceptibilidad biológicas.

Recopilación de la saliva y la medición de cortisol salival y alfa-amilasa en Frail comunitarios residentes adultos mayores a través de Cuidadores de Familia

El cortisol (CORT) se acumula en el eje del pelo cada vez mayor de los seres humanos y los primates no humanos. Se describen métodos para la extracción y el análisis de CORT cabello con alta precisión y sensibilidad. Medición de pelo CORT está particularmente bien adaptado para la evaluación de estrés crónico durante períodos de semanas a meses.

Extracción y análisis de cortisol de Derechos Humanos y de mono de pelo

Las investigaciones sobre las emociones de los logros académicos de los estudiantes de pregrado se han basado principalmente en autoinformes en entornos de laboratorio. Los estudios rara vez incluyen medidas biofisiológicas a estos autoinformes. Este protocolo describirá una metodología que integra los autoinformes y las medidas biofisiológicas para evaluar la respuesta y el rendimiento de los estudiantes durante una actividad de examen de laboratorio.

El uso de respuestas galvánicas de la piel, saliva, Biomarcadores y auto-informes para evaluar el rendimiento de Pregrado Estudiantes durante una actividad de examen de laboratorio

Se presenta un protocolo de estudio sobre cómo evaluar las asociaciones entre escuchar música y el estrés psicobiológico (medido por los niveles de estrés subjetivo, cortisol salival y alfa-amilasa salival) en la vida diaria. Se proporciona asesoramiento sobre el diseño del estudio, los materiales, los métodos, la selección de los participantes y el manejo estadístico. Se presentan y discuten resultados representativos.

Evaluación de los efectos de escucha de la música sobre el estrés en la vida diaria Psicobiológica

Análisis de concentración de cortisol de cabello proporciona una alternativa a las medidas tradicionales de cortisol; sin embargo, para recoger muestras del pelo de los americanos africanos, los científicos necesitan ser culturalmente informada y competente. El propósito de este protocolo es demostrar una técnica culturalmente informada para recoger muestras de pelo para el análisis de cortisol de afroamericanos.

Recoger muestras de pelo para cabello análisis de Cortisol en americanos africanos

Aquí presentamos un original método mixto combinando cuantitativo y un enfoque cualitativo para examinar con precisión experiencias de los participantes durante la prueba de estrés Social de Trier y la prueba de estrés Social de Trier para grupos.

Enfoque fenomenológico enactivo a Trier Social Stress prueba: un punto de vista de métodos mixtos

Presentamos un protocolo para determinar el disolvente de extracción óptimo para medir el cortisol del pelaje de koala. Los disolventes utilizados en este protocolo son metanol, etanol e isopropanol. Determinar un disolvente de extracción óptimo ayudará a medir de forma fiable el pelaje para determinar el impacto del estrés crónico en las koalas.

Medición de cortisol en Koala (Phascolarctos cinereus) Piel

El propósito de este artículo es identificar los cambios en los niveles de estrés después de la visita a tres entornos diferentes y describir los métodos utilizados para identificar los niveles de estrés basados en medidas de cortisol salival, amilasa y un autoinforme psicológico Instrumento.

Medición de los niveles de estrés biofísico y psicológico después de la visita a tres lugares con diferentes niveles de naturaleza

En este estudio, presentamos un protocolo para la extracción de cortisol de la aleta y la mandíbula de las especies de esturión. Los niveles de cortisol de aleta y mandíbula se examinaron más adelante comparando dos disolventes de lavado seguidos de ensayos ELISA. Este estudio pilotó la viabilidad del cortisol maxilar como un indicador de estrés novedoso.

Extracción de cortisol de las matrices de aleta de esturión y mandíbula

Se desarrolló un diseño experimental para investigar las influencias en tiempo real de una experiencia de examen para evaluar las realidades emocionales que los estudiantes experimentan en entornos y tareas de educación superior. Este diseño es el resultado de un enfoque interdisciplinario (por ejemplo, psicología educativa, biología, fisiología, ingeniería) y multimodal (por ejemplo, marcadores salivales, encuestas, sensor electrodérmico).

Un diseño experimental multidisciplinar iológico y multimodal para estudiar experiencias de examen auténtico casi en tiempo real

Este protocolo demuestra cómo proporcionar un enriquecimiento ambiental práctico y significativo para los cerdos que se alojan en pisos de listón durante las diferentes etapas de sus vidas, y cómo recoger muestras de saliva de una manera no invasiva para la medición de concentraciones de cortisol, como biomarcador para el estrés agudo.

Proporcionar un enriquecimiento ambiental significativo y medir el cortisol de saliva en cerdos alojados en pisos de lama

112 vistas.  Kwangwoon University. Nuestra investigación se centra en el pretratamiento de la saliva para mejorar la fiabilidad de la detección de cortisol. Este protocolo puede aplicarse al análisis de biomarcadores basado en saliva utilizando el ensayo de flujo lateral. Para comenzar, mezcle suavemente la muestra de saliva humana agrupada y sin identificar comercialmente antes de su uso para garantizar la homogeneidad.Almacene las muestras de saliva a cuatro grados Celsius y úselas dentro del período de almacenam...

Dispositivo portátil para el pretratamiento de la saliva para mejorar la detección del cortisol

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