Name: La metafase ADN-FISH se extiende para distinguir el ADN extracromosómico de regiones que tiñen homogéneamente en líneas celulares de cáncer humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-08-04T13:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Aprende a distinguir ADN extracromosómico de regiones HSR en líneas celulares de cáncer humano mediante DNA-FISH en metafase. Este protocolo permite visualizar la amplificación de oncogenes con resolución de célula única.

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la metafase adn-fish se extiende para distinguir el adn extracromosómico de regiones que tiñen homogéneamente en líneas celulares de cáncer humano

DNA-FISH Metaphase Spreads to Distinguish Extrachromosomal DNA from Homogeneously Staining Regions in Human Cancer Cell Lines

La metafase ADN-FISH se extiende para distinguir el ADN extracromosómico de regiones que tiñen homogéneamente en líneas celulares de cáncer humano

Whole-genome sequencing identifies focal DNA amplifications with base-pair resolution but cannot determine whether amplified sequences reside on ...

Nuestra investigación se centra en determinar si los oncogenes amplificados se encuentran en el ADN extracromosómico o dentro de regiones de tinción homogénea integradas de forma distinta en los cromosomas. El secuenciamiento no logra distinguir el ADN ec de la amplificación en RTH, por lo que nuestro protocolo resuelve esto con resolución a nivel de célula individual.Para comenzar, diluya la solución stock de Colcemid en una proporción 1:1 con agua ultrapura estéril. Para la detención en metafase, agregue 100 microlitros de la solución diluida de Colcemid a las células COLO320DM mantenidas en 10 mililitros de medio en crecimiento logarítmico con una confluencia del 70% al 90%, y colóquelas en un incubador de cultivo celular durante 45 minutos hasta toda la noche. Prepare un fijador de Carnoy fresco utilizando una proporción 3:1 de metanol a ácido acético. Mantenga el fijador de Carnoy sobre hielo durante todo el procedimiento de fijación. Prepare una solución fresca de cloruro de potasio 0,075 molar y caliente la solución en un baño de agua a 37 grados Celsius. Después de la centrifugación y el recuento celular, lave las células con PBS. Resuspenda suavemente en 10 mililitros de l

dna-fish-metaphase-spreads-to-distinguish-extrachromosomal-dna-from

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Investigación

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Biología

En este artículo se describe la selección de sondas adecuadas para una sola célula FISH, las técnicas de difusión de los núcleos de blastómeros, y la hibridación in situ y la puntuación de la señal, aplicadas al diagnóstico genético preimplantacional (DGP) en un entorno clínico.

FISH para el diagnóstico genético preimplantacional

Chromosomics: Detección de alteraciones numéricas y estructurales en todos los 24 cromosomas humanos de manera simultánea utilizando un nuevo ensayo FISH OctoChrome

El aislamiento y caracterización de las células tumorales circulantes (CTC) de la sangre de pacientes con cáncer es un tipo de biopsia líquida no invasiva y se asocia con recaída y progresión de la enfermedad. Este video describe la técnica de hibridación fluorescente in situ de ADN (DNA FISH) en CTC capturadas en un cable médico, para estudiar un gen específico de interés.

PECES DE ADN 3D: una técnica para localizar un gen específico en un cromosoma

Aquí se describe un protocolo para la detección simultánea de las modificaciones de histonas por secuencias de ADN de inmunofluorescencia y por FISH de ADN seguido por microscopía 3D y análisis (3D inmuno-ADN FISH).

Inmunofluorescencia y FISH Combinado de ADN en 3D conservados núcleos en interfase para estudiar los cambios en la organización nuclear 3D

Se describe un protocolo robusto y versátil para el análisis de la arquitectura nuclear por FISH 3D DNA usando sondas fluorescentes marcados directamente.

Robusto PESCADO ADN 3D utilizando sondas marcadas directamente

Vías de reparación del ADN son esenciales para el mantenimiento de la integridad genómica y la prevención de la mutación y el cáncer. El objetivo de este protocolo es cuantificar la inestabilidad genómica mediante la observación directa de las aberraciones cromosómicas en metafase se propaga a partir de células B de ratón utilizando hibridación in situ fluorescente (FISH) para las repeticiones teloméricas de ADN.

Análisis rápido de aberraciones cromosómicas en linfocitos B de ratón por PNA-FISH

Presentamos un nuevo enfoque para caracterizar las células del tumor. Combinamos la inmunofluorescencia con ADN fluorescentein situ-hibridación para evaluar células capturadas por un alambre médico funcionalizado capaz de en vivo enriquecer CTC directamente de sangre del paciente.

Caracterización de células del Tumor mediante un alambre de médico para la captura de circulación de las células del Tumor: un enfoque 3D basada en la inmunofluorescencia y DNA FISH

Las propagaciones de superficies nucleares son una herramienta indispensable para estudiar los eventos cromosómicos durante la meiosis. Aquí demostramos un método para preparar y visualizar cromosomas meióticos durante la profase I a partir de espermacitos de peces brabra.

Preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra

3D multicolor DNA FISH representa una herramienta para visualizar múltiples loci genómicos dentro de núcleos conservados 3D, definiendo inequívocamente sus interacciones recíprocas y localización dentro del espacio nuclear a un solo nivel de célula. Aquí, se describe un protocolo paso a paso para un amplio espectro de células primarias humanas.

Herramienta 3D Multicolor DNA FISH para estudiar la arquitectura nuclear en células primarias humanas

La combinación de preparaciones de halo de ADN con hibridación fluorescente in situ permite el análisis de alta resolución de las interacciones genómicas con el nucleoesqueleto. El genoma unido conduce a señales fluorescentes hibridadas ubicadas dentro de los núcleos extraídos residuales, mientras que el genoma no unido está en el halo de ADN que rodea los núcleos residuales.

Hibridación fluorescente in situ en preparaciones de halo de ADN para revelar cromosomas completos, telómeros y loci de genes

Este protocolo proporciona un método reproducible para visualizar la amplificación de genes en muestras de tejido fijadas en formol e incluidas en parafina (FFPE).

Detección robusta de la amplificación génica en muestras fijadas en formol e incluidas en parafina mediante hibridación fluorescente in situ

Aprende a distinguir ADN extracromosómico de regiones HSR en líneas celulares de cáncer humano mediante DNA-FISH en metafase. Este protocolo permite visualizar la amplificación de oncogenes con resolución de célula única.

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