Name: Aislamiento de la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprende a aislar la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo. Este protocolo optimizado permite estudiar interacciones planta-microbio durante el establecimiento de plántulas.

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<ol>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01916-500G</td><td>Componente del medio de agar LB; 15 g/L.</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Lab1st&nbsp;</td><td>SV120H</td><td>Usado para esterilizar instrumentos/materiales o validar tratamiento aséptico.</td></tr><tr><td>Kit de extracción de ADN bacteriano</td><td>Promocell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Extracción de ADN&nbsp;</td></tr><tr><td>Configuración de conteo/registro de colonias</td><td>OCS</td><td>B079Y5W57N</td><td>Necesario para registrar UFC, morfotipos y diferencias en placas; el manuscrito no especifica el contador/modelo.</td></tr><tr><td>Viales de crioconservación</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359033</td><td>Implícito para el almacenamiento de cepas en glicerol a -80 &deg;C; no se especifica explícitamente pero es necesario para el paso de preservación.</td></tr><tr><td>Sistema digital de registro de aislados</td><td>No especificado en el manuscrito</td><td>No aplicable</td><td>Usado para registrar metadatos de aislados: origen, réplica, condición, tratamiento de esterilización, fecha de aislamiento, medio en placa, morfología, estado de identificación.</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>83813440</td><td>Usado para preparar solución de etanol al 70% v/v para la esterilización de la superficie de semillas.</td></tr><tr><td>Papel filtro</td><td>Fisher Scientific</td><td>11718772</td><td>Alternativa opcional de soporte de germinación.</td></tr><tr><td>Fórceps/Pinzas</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930229</td><td>Usados para transferir semillas y recolectar plántulas germinadas.</td></tr><tr><td>Kit de extracción de ADN genómico</td><td>PromoCell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Usado para extraer ADN genómico de cultivos bacterianos purificados; no se especifica el kit/método exacto.</td></tr><tr><td>Glicerol, estéril 80%</td><td>VWR</td><td>24388364</td><td>Mezclado 1:1 v/v con cultivo líquido para la preparación de cepas en crioconservación.</td></tr><tr><td>Caperuza de flujo laminar Bio48</td><td>Faster</td><td>LAB-CAP-22</td><td>Requerida para el manejo aséptico de semillas, transferencias de esterilización y preparación de materiales estériles.</td></tr><tr><td>Medio de agar LB</td><td>VWR</td><td>846495000</td><td>Medio estándar utilizado para cultivo comparativo; por litro: 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 10 g de NaCl, 15 g de agar.</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrifugación</td><td>Ratiolab</td><td>RATI5615000</td><td>Usados para la esterilización de semillas y procesamiento de muestras.</td></tr><tr><td>Medio MS</td><td>Sigma</td><td>M0404-10L</td><td>Mencionado como soporte de germinación estéril para germinación axénica.</td></tr><tr><td>NZYTaq II 2&times; Master mix</td><td>Nzytech</td><td>MB35803</td><td>Mezcla PCR para amplificación</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm/Merck</td><td>HS234526A</td><td>Usado para sellar placas de germinación mientras se reduce la contaminación.</td></tr><tr><td>Platos de Petri</td><td>Labbox</td><td>PDIP-E9N-500</td><td>Usados para configuración de germinación, emplatado y manejo de semillas esterilizadas.</td></tr><tr><td>Fitoagar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>9002-18-0</td><td>Mencionado como un soporte de germinación estéril alternativo opcional.</td></tr><tr><td>Juego de pipetas y puntas</td><td>Merck</td><td>EP3123000918-1EA</td><td>Usados para retirar soluciones de esterilización, lavado, dilución y emplatado.</td></tr><tr><td>Medio de agar R2A</td><td>HI-MEDIA</td><td>M1743-500G</td><td>Medio adicional opcional para flujos de trabajo de culturomica extendida.</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio, NaCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>10040460</td><td>Usado para preparar NaCl estéril al 0.45% para homogeneización y diluciones seriadas; también parte del medio LB.</td></tr><tr><td>Hipoclorito de sodio</td><td>Carlo Erba</td><td>370323</td><td>Usado para preparar solución de hipoclorito de sodio al 20% v/v para la esterilización de la superficie de semillas. Corrosivo; requiere EPI.</td></tr><tr><td>Péstilos desechables estériles</td><td>Eppendorf</td><td>EP0030120973</td><td>Usados para homogeneización de semillas secas y plántulas germinadas.</td></tr><tr><td>Mezclador vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901137</td><td>Usado para resuspender células microbianas de los homogeneizados.</td></tr></tbody></table>

aislamiento de la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo

Isolation of Tomato Seed-Associated Microbiota Through Controlled Germination and Comparative Culturing

Aislamiento de la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo

Surface sterilization is a critical yet frequently under-optimized step in studies aiming to isolate seed-associated microorganisms, as excessively harsh ...

Nuestra investigación se centra en desarrollar un flujo de trabajo culturomico para estudiar la microbiota asociada a las semillas de tomate durante los primeros estadios de establecimiento de la plántula. Los protocolos tradicionales pueden omitir microorganismos recuperables solo tras una germinación controlada; este protocolo los recupera de manera consistente.Para comenzar, obtenga semillas de un único lote de semillas de tomate y distribúyalas en los grupos experimentales correspondientes. Transfiera de tres a cinco semillas a cada tubo estéril de microcentrifugado de 2 mililitros dentro de una cabina de flujo laminar. Añada 1 mililitro de etanol al 70 % al tubo para sumergir completamente las semillas. Incube los tubos durante cinco minutos con mezcla suave utilizando un rotador de tubos a 25 revoluciones por minuto. Mediante una pipeta estéril, elimine completamente el etanol. Inmediatamente, añada 1 mililitro de la solución de trabajo al 20 % de hipoclorito de sodio para sumergir completamente las semillas. Incube los tubos durante 10 minutos con agitación suave utilizando un rotador de tubos a 25 revoluciones por minuto, luego, con una pipeta estéril, elimine completamente

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Fuente: Hassan, J. A., et al. Identificación de alto rendimiento de resistencia a Pseudomonas syringae pv. Tomate en tomate usando el ensayo de inundación de plántulas. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra un método para detectar resistencia bacteriana en diferentes cepas de tomate utilizando plántulas de diez días inoculadas con una suspensión bacteriana. Explica cómo las bacterias invaden a través de los estomas, entregan proteínas efectoras para suprimir la inmunidad de las plantas y...

Ensayo de inundación de plántulas para detectar la resistencia bacteriana en tomates

Fuente: Nathoo, N., et al. Un sistema de cocultivo hidropónico para el análisis simultáneo y sistemático de las interacciones moleculares y la señalización de plantas / microbios. J. Vis. Exp. (2017).Este video demuestra un sistema de cocultivo hidropónico para estudiar las interacciones planta-bacteria en condiciones estériles. Las plántulas de plantas se transfieren a un medio de crecimiento estéril y ácido, se incuban y se inspeccionan para detectar contaminación antes de la inoculación con...

Un sistema de cocultivo para estudiar las respuestas moleculares de las plantas hospedadoras y las bacterias que interactúan

Las bacterias endófitas colonizan los tejidos vegetales y promueven el crecimiento de las plantas.Para estudiar su impacto en el crecimiento de las plantas de tomate bajo estrés salino, comience con plántulas estériles que muestren hojas y raíces en desarrollo.Sumerja las raíces de la plántula experimental en una suspensión de bacterias endófitas; deje el control sin inocular.Transfiera ambos grupos a suelo esterilizado para evitar interferencias microbianas externas e incube en una cámara de...

Mejora de la tolerancia al estrés salino en plantas de tomate a través de la colonización bacteriana endófita

Fuente: Matthysse, A. G. Adherencia de bacterias a superficies vegetales medida en laboratorio. J. Vis. Exp., (2018)Este vídeo demuestra un protocolo para medir la colonización radicular de plántulas de tomate por bacterias patógenas silvestres y deficientes en celulosa. Los recuentos viables de bacterias que se adhieren estrechamente muestran una mayor adhesión y formación de microcolonias por parte de la cepa silvestre, lo que pone de manifiesto el papel de la celulosa en la colonización...

Evaluación de la colonización radicular de plántulas de tomate por una bacteria patógena utilizando recuentos celulares viables

Un método sencillo para medir y caracterizar la adherencia bacteriana a las plantas, especialmente las raíces y brotes, se describe en este artículo.

Adherencia de bacterias a las superficies de midieron en el laboratorio de la planta

Aquí, presentamos un método versátil para la transformación de la raíz de tomate seguido de la inoculación con Ralstonia solanacearum para realizar un análisis genético sencillo para el estudio de la enfermedad bacteriana de la enfermedad de wilt.

Transformación de raíz de tomate Seguida de inoculación con Ralstonia Solanacearum para el análisis genético directo de la enfermedad bacteriana de Wilt

El ensayo de inundación de plántulas facilita el cribado rápido de las adhesiones de tomate silvestre para la resistencia a la bacteria pseudomonas de las siestas. Este ensayo, utilizado junto con el ensayo de crecimiento bacteriano de plántulas, puede ayudar a caracterizar aún más la resistencia subyacente a la bacteria, y se puede utilizar para examinar las poblaciones de mapeo para determinar la base genética de la resistencia.

Identificación de alto rendimiento de la resistencia a Pseudomonas syringae pv. Tomate en tomate usando el ensayo de inundación de plántulas

Para obtener un insecto axénico, se esteriliza la superficie de su huevo y la larva eclosionada se cría posteriormente con hojas axiénicas. Este método proporciona una forma eficiente para la preparación de insectos axénicos sin administrar antibióticos o desarrollar una dieta artificial, que también se puede aplicar a otros insectos que comen hojas.

Preparación y cría de insectos axénicos con plántulas cultivadas en tejidos para estudios de interacción entre la microbiota huésped-intestino del escarabajo de la hoja

Este protocolo presenta un resumen detallado de las estrategias para inocular las raíces de las plantas con microbios transmitidos por el suelo. Ejemplificado para los hongos Verticillium longisporum y Verticillium dahliae, se describen tres sistemas diferentes de infección radicular. Se destacan las aplicaciones potenciales y los posibles análisis posteriores, y se discuten las ventajas o desventajas para cada sistema.

Estrategias de inoculación para infectar las raíces de las plantas con microorganismos transmitidos por el suelo

Este protocolo tiene como objetivo proporcionar procedimientos detallados para recolectar, fijar y mantener muestras de plantas micoheterótrofas, aplicando diferentes técnicas de microscopía como microscopía electrónica de barrido y transmisión, microscopía de luz, confocal y fluorescencia para estudiar la colonización fúngica en tejidos vegetales y semillas germinadas con hongos micorrícicos.

Técnicas de microscopía para interpretar la colonización fúngica en tejidos de plantas micoheterótrofas y germinación simbiótica de semillas

La semilla de tomate es un modelo importante para estudiar la genética y la biología del desarrollo durante la reproducción de las plantas. Este protocolo es útil para limpiar las semillas de tomate en diferentes etapas de desarrollo para observar la estructura embrionaria más fina.

Un protocolo de limpieza eficiente para el estudio del desarrollo de semillas en tomate (Solanum lycopersicum L.)

Aprende a aislar la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo. Este protocolo optimizado permite estudiar interacciones planta-microbio durante el establecimiento de plántulas.

Aislamiento de la microbiota asociada a semillas de tomate mediante germinación controlada y cultivo comparativo

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