Entrevista: El VIH-1 La escisión del ADN proviral uso de una recombinasa evolucionado

Me llamo JohE Hvar y me dirijo al Departamento de Biología Celular y Biología del HE Pet Institute en Hamburgo, Alemania. El HE PET Institute es un instituto de investigación básica que se centra exclusivamente en la educación física humana, los virus patógenos y, sí, y temas relacionados, diría yo. Por lo tanto, nuestro departamento está principalmente interesado en investigar la regulación de la expresión génica del VIH y en la interacción particularmente intracelular del VIH con los componentes de la célula huésped.

Sobre la base de estos datos, también intentamos desarrollar terapias nuevas y experimentales para la enfermedad del VIH. El problema con el VIH es que el VIH es un retrovirus o lentivirus y, como todos los retrovirus, el VIH se integra tras la infección de la célula huésped, el genoma viral en el genoma de la célula huésped. Hasta ahora, ya no se puede deshacerse del provirus integrado.

Eso significa que, en términos de terapia, estamos hablando de una enfermedad crónica con una terapia de por vida y, básicamente, con todos los problemas relacionados con las terapias de por vida, como los efectos secundarios de los medicamentos, la aparición de resistencia, etc. Bueno, desde hace muchos años en la investigación básica, sabemos que la llamada recombinasa, que se produce naturalmente en recombinaciones como en la levadura o en las bacterias, por ejemplo. Y estas recombinaciones son reconocidas, secuencias específicas de ADN y genes aleatorios, y reordenados el genoma, y así sucesivamente.

Y, en particular, una recombinasa llamada recombinación decre se utiliza en la investigación básica y el situ en la investigación básica. Y CRE es básicamente reconocer su secuencia específica. Y si tiene una secuencia ubicada entre dos sitios de reconocimiento, CRE puede eliminar la secuencia intermedia básicamente.

Entonces la idea ya desde hace 10 o 15 años es de la medicina para erradicar el virus y por otro lado, usar como la recombinasa como el dolor, por ejemplo, para extirpar el perfil. ADN, esto debería ser en teoría posible porque tras la infección, el VIH transcribe de forma inversa, su genoma de AR en ADN y, debido a este proceso de transcripción inversa, se generan secuencias llamadas repeticiones terminales largas y marcan básicamente las cinco bris o el comienzo y el borde de brime libre, el final del perfil integrado D.So en teoría, si se pudiera llegar a una recombinación de tres, que re se reconoce específicamente en una secuencia en el LTR, por lo que sería, el desacuerdo básicamente atacaría el extremo cinco primo y el extremo BRI libre del perfil integrado, el ADN extirparía el ADN y básicamente erradicaría el virus de la célula desinfectada. Ahora, el problema con el VIH es que tenemos diferentes aislados tal vez también en, en, en una sola persona, en un solo paciente, sin embargo, particularmente como sabemos hasta ahora, la secuencia está al principio y al final del virus del genoma viral.

En otras palabras, los LTR están más conservados que, por ejemplo, los genes del VIH. Así que creo que hay una buena posibilidad de que podamos salirnos con la nuestra con solo unos pocos números de recombinancia que básicamente reconozcan la vasta madurez de todos los aislados de VIH. Y si no, básicamente entonces tenemos que generar uno nuevo por evolución molecular, que puede ser en un futuro semi autotomizado.

Y lo hará, el proceso será mucho más rápido que hacerlo en el laboratorio. En nuestro colega, el Dr. Frank del Instituto Max Splunk llegó al final de la imagen. Básicamente, es un experto en recombinasa y todo.

Básicamente, lo que utilizó es lo que llamamos un método de evolución molecular. Pero el método se basa en la tecnología de reacción en cadena polimérica por PCR. Y toma el gen de los peines de grado de recombinasa que ocurren naturalmente y establece una PCR o múltiples reacciones de PCR en condiciones que introducen mutaciones de manera aleatoria.

Y el truco ahora es seleccionar las nuevas versiones de la recombinasa que han adquirido una nueva capacidad o una nueva actividad, es decir, el reconocimiento de secuencias específicas del VIH. Y lo está haciendo en ciclos reiterados. Tomó alrededor de 120 o más de 120 ciclos para hacer este método molecular, este tipo de método de evolución molecular.

Cuando finalmente se le ocurrió este específico, ahora llamado tres para la recombinación específica de LTR con esta nueva recombinación que ahora reconoce específicamente las secuencias del VIH. Así que el estudio inicial aquí fue que los experimentos con los recombinantes se realizaron aquí en el Instituto PET de HE en Hamburgo. Y lo que hicimos fue entregar esta recombinación con vectores, vectores genéticos en un cultivo de células humanas que habían sido infectadas con un aislado más o menos clínico de H VIH V.

Y con el tiempo, a lo largo de seis u ocho semanas, pudimos demostrarlo. Ahora el recombinante es emocionante cuantitativamente, integraron el perfil del VIH DA, básicamente toda la cultura se cura deshaciéndose del VIH. Ciertamente, existen numerosos problemas con esta tecnología.

En primer lugar, tenemos que asegurarnos de que la expresión de recombinasa no esté causando efectos secundarios tóxicos. No lo esperamos, no esperamos esto porque para las recombinaciones que ocurren naturalmente como el gre, existen los llamados animales transgénicos. Expresan esta recombinación GRE y está bien, por lo que hay algunos problemas, pero no demasiado significativos.

Puedo decirlo en este punto. Así que hay esperanza de que no haya efectos secundarios tóxicos, pero nunca se sabe cuándo hay que hacer los experimentos. Y también hay problemas que yo, tal vez no reconozcamos todos los aislados clínicos con él para que podamos deshacernos del aislado dominante, el aislado de VIH en un paciente.

Pero seleccionaremos entre aislamientos menores y menores a lo largo del tiempo. Esto es, no sabemos, tenemos que hacer estos experimentos. Luego hay un gran problema con la entrega de genes, con la tecnología de vectores.

Tenemos que usar los llamados vectores lentivirales o también vectores retrovirales para entregar el gen o el gen de la recombinasa. Entonces, ¿hay efectos secundarios? ¿Estos vectores están causando efectos tóxicos?

Estas son todas las preguntas que tenemos. Además, esperamos mejorar la actividad de los panales. Ellos, la recombinación está actuando justo más rápido de lo que lo vemos ahora, un par de semanas, la actividad.

Así que todas estas son preguntas abiertas que tenemos que desarrollar en los próximos años. Y este es ahora sin duda el problema porque las recombinasas no están disponibles por vía oral. Así que no habrá píldora, píldora de recombinasa simplemente bien, y te desharás del virus.

Entonces, pero especulando sobre futuras terapias, tenemos que pensar en enfoques de terapia génica. Así que tal vez uno pueda concebir que aislemos las llamadas células madre hematopoyéticas o células CD 34 positivas de la sangre de pacientes infectados por el VIH. Y luego, en el laboratorio, introducimos el gen de los panales en las células de este paciente.

Finalmente, reintroducimos, reinyectamos al paciente, reinamos, infundimos las células del paciente y ahora modifican genéticamente las células del paciente en la espalda del mismo paciente. Entonces, lo que debería suceder es que el sistema inmunológico o el sistema hematopoyético del paciente se reconstituya con el tiempo, al menos parcialmente, con células que, al infectarse con el VIH, pueden deshacerse del virus porque ahora expresan una recombinasa. Por lo tanto, el efecto sería que la carga viral disminuirá en el paciente, pero mejorará la calidad de vida, sin duda.

Y también podemos esperar que el sistema inmune se esté reconstituyendo en estos pacientes al menos parcialmente. Así que ahora, la función, las células inmunitarias que son completamente funcionales, serán capaces, con suerte, de atacar a las células infectadas restantes en estos pacientes. Si realmente podemos o no erradicar por completo y totalmente el VIH de un paciente que nosotros, no podemos decirlo en este momento.