Name: La disección del sistema nervioso central de larvas de Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Aprende a diseccionar el sistema nervioso central de larvas de Drosophila melanogaster en tercer estadio. Esta técnica permite visualizar y analizar la estructura del SNC para estudios de neurobiología y desarrollo.

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<ol><li> Diseccionar 3 de larvas, dejando SNC unido a la cutícula. Colocar en un tubo de 1,5 ml. </li><li> Fijar en PBS (1x) que contiene 2% de formaldehído durante 40 min con la oscilación. ; Uso 250ul por cada SNC 50-10 disecados. </li><li> Eliminar el formaldehído y el breve lavar 3 veces con PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Utilice una tira fina pipeta Pasteur para evitar la pérdida de tejido. </li><li> Bloque no específicas sitios de unión a proteínas y permeabilizar las membranas celulares mediante la incubación de los tejidos 1-8 horas en PBST + 5% de BSA, meciéndose a 4 ° C. </li><li> Se incuban en anticuerpo primario diluido en PBST + 5% BSA mecedora a 4 ° C durante la noche. Dilución del anticuerpo óptima variará para diferentes anticuerpos. </li><li> Enjuagar 3 veces en PBST seguido de dos lavados 30 minutos a 4 ° C. </li><li> Se incuban en anticuerpo secundario diluido en PBST + 5% de BSA para 1.3 horas meciéndose a 4 ° C. Enjuagar 3 veces en PBST seguido de dos lavados 30 minutos a 4 ° C. Si el secundario está conjugado con un compuesto sensible a la luz, envuelva el tubo con papel de aluminio. </li><li> Diseccionar tejido más (si es necesario) y montar en las diapositivas. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este video muestra la forma de analizar el sistema nervioso central del tercer estadio las larvas de Drosophila. Después de la disección, el sistema nervioso central pueden ser teñidos utilizando un protocolo estándar de inmunohistoquímica. En la actualidad, queda mucho por descubrir acerca de cómo el sistema nervioso adulto se genera, así como la forma en que almacena y transmite información. Los estudios de los países en desarrollo larval de Drosophila SNC debe mejorar el conocimiento de cableado del sistema nervioso y la función. ...

<table><tbody><tr><td>Pinzas</td><td>punta fina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de reloj de 9 pozos</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de plástico</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la disección del sistema nervioso central de larvas de drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

El sistema nervioso central (SNC) de las larvas de Drosophila es compleja y poco comprendida. Una manera de investigar el sistema nervioso central es el uso de inmunohistoquímica para examinar la expresión de la novela de varias proteínas y marcadores. Tinción de las larvas de todo es práctico, porque la cutícula dura evita que los anticuerpos de penetrar en el interior de la cavidad corporal. Con el fin de manchar estos tejidos es necesario disecar el animal antes de la fijación y tinción. En este artículo se muestra cómo diseccionar las larvas de Drosophila, sin dañar el sistema nervioso central. Empiece por romper la larva en el medio con un par de pinzas finas, y luego gire a la cutícula &quot;de adentro hacia fuera&quot; para exponer el sistema nervioso central. Si la disección se realiza con cuidado el sistema nervioso central permanecerá unido a la cutícula. Por lo general, mantener el sistema nervioso central unido a la cutícula a lo largo de los pasos de fijación y la tinción, y sólo eliminar por completo el sistema nervioso central de la cutícula, justo antes de montar las muestras sobre portaobjetos de vidrio. También muestran algunas imágenes representativas de un sistema nervioso central larvas manchadas con Eva, un factor de transcripción expresado en un subconjunto de neuronas del sistema nervioso central. El artículo concluye con una discusión de algunos de los usos prácticos de esta técnica y las posibles dificultades que puedan surgir.

En este artículo se muestra cómo disecar el sistema nervioso central del tercer estadio las larvas de Drosophila.

La disección del sistema nervioso central de larvas de Drosophila melanogaster

El sistema nervioso central (SNC) de las larvas de Drosophila es complejo y no se comprende plenamente. Una forma de investigar el SNC es utilizar la inmunohistoquímica para...

Me llamo Nate Fer. Soy estudiante de posgrado aquí en Princeton. Bien. Lo que quieres hacer es encontrar el gusano y luego transferirlo a una placa con algo de PBS.Así es como se verán y los rompen por la mitad, y todas las entrañas salen volando. Esto es, tengo aquí la cutícula con un grupo de todas las estructuras internas y trato de asegurarme de que esté vuelta del revés, y de que el SNC aún esté adherido. Entonces. Listo. Sí. Así que está justo ahí.Allí mismo. ¿Cuál? Puedes ver en mi fórceps derecho.Aquí tiene dos lóbulos diferentes y luego está el propio SNC que se extiende hacia abajo como una raíz pivotante y está justo aquí, al lado derecho de los ganchos oscuros de la boca y del resto de la cutícula. ¿Le gustaría separar el SNC de esta manera? Sí, claro.Puedo hacerlo. Y eso es viéndolo desde arriba hacia abajo. Así que se ven los dos lóbulos y luego se ve el sistema nervioso central (SNC) mismo.Entonces, ¿por qué realiza usted este experimento? Bueno, estamos interesados en analizar la expresión de proteínas en el sistema nervioso de las larvas. Por lo tanto, la mejor manera de hacerlo es simplemente separar el tejido larval.Y dado que es difícil que los anticuerpos penet

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Drosophila larval NMJ Disección

Drosophila melanogaster larvas de disponer de un sistema modelo ideal para investigar los mecanismos de transporte axonal en larvas de los nervios segmentarios. El uso de este procedimiento, 3 de larvas portadoras de mutaciones diferentes pueden ser comparados a las larvas de tipo salvaje.

La visualización de larvas Nervios segmentarios en 3 Rd Instar Drosophila Preparación de larvas

Se describe un Flippase inducida intersectorial Gal80/Gal4 represión (FINGR) método, permitiendo al tejido-específica para determinar FLP GAL80 patrones de expresión. Siempre que sea Gal4 y la superposición de FLP, Gal4 expresión es activada (GAL80 un tirón hacia fuera) o desactivar (GAL80 volcó en). El método FINGR es versátil para el análisis clonal y la asignación de circuitos neuronales.

La cartografía y la aplicación de potenciador de la trampa de expresión Flippase en larvas y adultos Drosophila SNC

Este video describe cómo diseccionar y aislar el cerebro adulto de Drosophila, un procedimiento necesario para visualizar el órgano, que de otro modo estaría oscurecido por la cutícula, el ojo y el tejido traqueal. El protocolo de ejemplo muestra una demostración detallada que produce preparaciones de alta calidad que se pueden utilizar para la inmunotinción y los métodos de imagen en la neurobiología de Drosophila.

Drosophila Disección del cerebro de adultos: un método en neurobiología de moscas

Este video muestra la disección y montaje de explantes cerebrales de larvas de Drosophila. El sistema nervioso central (SNC), unido a los discos oculares, se extrae de las larvas y luego se monta en un portaobjetos de vidrio en una solución salina fisiológica.

Disección y montaje de explantes de cerebro de larvas de mosca de la fruta

Un paradigma de lesión utilizando el cable de Drosophila larval nervio ventral para investigar la regeneración del sistema nervioso central y la reparación es descrito. Stabbing seguido por microscopía confocal de barrido láser en especímenes de lapso de tiempo y fijo, combinada con el análisis cuantitativo con el software desarrollado a propósito y la genética, se utilizan para investigar los mecanismos moleculares de la regeneración del SNC y reparación.

Un paradigma de Lesiones de investigar reparación del sistema nervioso central en<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo detalla un método simplificado utilizado para llevar a cabo imágenes de células vivas en el contexto de un cerebro de larvas intacta. Enfoques imágenes de células vivas tienen un valor incalculable para el estudio de las divisiones asimétricas de células madre neuronales, así como otros procesos neurogénicos y de desarrollo, descubriendo constantemente los mecanismos que se pasaron por alto anteriormente.

Imágenes en vivo de<em&gt; Drosophila</em&gt; larvales neuroblastos

Este protocolo describe la disección y el immunostaining del adulto de Drosophila melanogaster los tejidos del cerebro. Específicamente, este protocolo destaca el uso de setas neuronas cuerpo y fotorreceptor Drosophila como subconjuntos neuronal de ejemplo que pueden utilizarse con precisión para descubrir principios generales subyacentes a muchos aspectos del desarrollo neuronal.

Disección y tinción inmunofluorescente de seta del cuerpo y las neuronas fotorreceptoras en cerebros de adultos de Drosophila melanogaster

Este protocolo describe un método para registrar la actividad eléctrica descendente de la sistema de nervioso central de Drosophila melanogaster para permitir pruebas de agentes farmacológicos, mutaciones genéticas de las proteínas neuronales, conveniente y rentable o el papel de los caminos fisiológicos inexplorados.

Registro electrofisiológico de la actividad del sistema nervioso Central de tercer estadio de Drosophila Melanogaster

Este protocolo describe tres pasos para preparar los lóbulos ópticos de larvas y adultos de Drosophila para la obtención de imágenes: 1) disecciones cerebrales, 2) inmunohistoquímica y 3) montaje. Se hace hincapié en el paso 3, ya que se requieren distintas orientaciones de montaje para visualizar estructuras específicas de lóbulos ópticos.

Disección, inmunohistoquímica y montaje de cerebros de larvas y adultos de Drosophila para la visualización del lóbulo óptico

Aquí, discutimos un flujo de trabajo para preparar, diseccionar, montar y obtener imágenes de cerebros de explante vivos de larvas del tercer estadio de Drosophila melanogaster para observar la dinámica celular y subcelular en condiciones fisiológicas.

Imágenes de células vivas de cerebros larvales del tercer estadio de Drosophila melanogaster

Aprende a diseccionar el sistema nervioso central de larvas de Drosophila melanogaster en tercer estadio. Esta técnica permite visualizar y analizar la estructura del SNC para estudios de neurobiología y desarrollo.

La disección del sistema nervioso central de larvas de Drosophila melanogaster

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