Name: La obtención de huevos de Xenopus laevis mujeres (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Aprenda a obtener y desenjutar huevos de Xenopus laevis mediante inducción hormonal con gonadotropina coriónica humana. Este protocolo garantiza la calidad de los ovocitos para estudios de biología celular y desarrollo.

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El protocolo de texto completo de este enfoque experimental está disponible en <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">protocolos actuales en Biología Celular</a> .

Los autores no tienen nada que revelar.

la obtención de huevos de xenopus laevis mujeres

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Los huevos de Xenopus laevis intacta, lisadas y / o fraccionados son útiles para una amplia variedad de experimentos. Este protocolo muestra cómo inducir a la puesta de huevos, recoger y dejelly los huevos, y ordenar los huevos para eliminar los huevos dañados.

La obtención de huevos de Xenopus laevis mujeres

Los óvulos de Xenopus laevis intactos, lisados y/o fraccionados son útiles para una amplia variedad de experimentos. Este protocolo muestra cómo inducir la puesta de huevos, ...

Los extractos de huevos de Xip Labis son útiles como fuente de material citoplasmático y de orgánulos para la reconstrucción in vitro de eventos celulares, como el ensamblaje nuclear y la importación de proteínas nucleares. Por supuesto, antes de poder utilizar los extractos de huevo, primero es necesario obtener los huevos de ranas hembras. Hola, me llamo Marie Cross y soy estudiante de posgrado en el laboratorio de la Dra. Maureen Power, del Departamento de Biología Celular de la Universidad de Emory en Atlanta, Georgia.Hoy les vamos a mostrar cómo obtener óvulos D de hembras adultas de opus lavis. Este procedimiento incluye los siguientes pasos: inducción de la puesta de huevos en ranas con suero de gonadotropina de yegua preñada, inducción de la puesta de huevos con gonadotropina coriónica humana y selección para descartar óvulos o citozoides defectuosos. Así que comencemos.Para producir huevos, primero se induce a las ranas hembra maduras con gonadotropina de suero de yegua preñada. Para iniciar el procedimiento de inducción, prepare un tanque que contenga cloruro de sodio de cien milimolar para albergar a las ranas. Después de la inyección, las ranas inducidas deben mantenerse a una densidad de aproximadamente una rana por litro.La producción óptima de huevos se mantiene alojando a las ranas a 18 grados Celsius. Utilizando una aguja de 27 gauge conectada a una jeringa de un mil, inyecte a la rana subcutáneamente en el saco linfático dorsal con 0,5 mils de 200 unidades por mil de gonadotropina sérica de yegua preñada.Devuelva las ranas adultas al tanque que contiene cloruro de sodio de cien milimolar. Después de dos a tres días, induzca la puesta de huevos inyectando a las ranas 0,5 mililitros de cien unidades por mililitro de gonadotropina coriónica humana; vuelva a inyectar subcutáneamente en la bolsa linfática dorsal.Después de la inyección, coloque cada rana en cinco litros de cloruro de sodio de cien milimolar. Es mejor colocar cada rana en un recipiente individual, ya que la calidad de los huevos varía de una rana a otra. Aproximadamente entre 16 y 22 horas después de la inyección de gonadotropina coriónica humana, retire la rana del tanque de agua limpia y vierta los huevos en un vaso de precipitados.Es recomendable observar a las ranas durante uno o dos días en busca de signos de infección en el sitio de inyección. En esta etapa, una cubierta gelatinosa transparente rodea a cada huevo, lo que evita que se toquen entre sí. Para desgelatinizar los huevos, enjuáguelos una vez con solución de cisteína al 2 %, pH 8, y continúe luego la incubación en un recipiente con 100 mL de solución de cisteína al 2 % por rana durante aproximadamente cinco minutos. A temperatura ambiente, agite suavemente los huevos periódicamente tras cinco minutos.Vierta la solución de cisteína de los huevos de deje y lávelos tres veces con una solución de Ringer modificada al 0,25 x. Para eliminar los residuos, vierta los huevos en una placa de Petri de vidrio de cien milímetros, trabajando bajo un microscopio estereoscópico. Retire los huevos dañados de la placa de Petri con una pipeta Pasteur.Los huevos maduros de xip tienen una mitad superior con pigmentación oscura y una mitad inferior clara. Debe ser visible un pequeño punto blanco, del tamaño de una punta de alfiler, indicativo de la maduración del ovocito, en el centro de la hemiesfera oscura del huevo maduro. Un buen huevo es aquel que presenta una pigmentación uniforme y bien definida.Cualquier estructura sin este punto blanco es un ovocito y debe eliminarse. También deben eliminarse los huevos que sean blancos, agrandados o que no tengan una pigmentación uniforme. Un huevo particularmente defectuoso aparecerá como una bola blanca esponjosa con un límite entre los hemisferios completamente borroso. Lave y seleccione los huevos dos o tres veces vertiendo sobre ellos tampón de lisis para huevos y luego retirando cuidadosamente el tampón, minimizando el número de huevos que se derraman.Ahora se pueden lisar los huevos y preparar los extractos. Acabamos de mostrarle cómo obtener y desjelatinar huevos de hembras maduras de Xenopus laevis. Asegúrese de ver nuestros otros dos videos, en los que se muestra cómo preparar extractos de huevo crudos, así como cómo reconstituir in vitro el ensamblaje nuclear utilizando extractos de huevo fraccionados.Así que eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La fertilización de Oocitos de Xenopus Utilizando el método de transferencia de acogida

Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la microscopía confocal.

Células vivas, imágenes y análisis cuantitativo de las células epiteliales embrionarias en Xenopus laevis</em

Xenopus huevo extracto es un sistema modelo útil para investigar el punto de control de daño en el DNA. Este protocolo es para la preparación de extractos de huevo de Xenopus y reactivos de punto de control de daño de ADN que inducen. Estas técnicas son adaptables a una variedad de enfoques que dañan el ADN en el estudio de la señalización de punto de control de daño de ADN.

Estudio del Checkpoint Daño del ADN utilizando<em&gt; Xenopus</em&gt; Extractos de huevo

Producción de<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Huevos Extrae para identificar los ARN asociada a los microtúbulos

Se describe un método para el análisis de la degradación de proteínas usando radiomarcado y proteínas de fusión luciferasa-en extracto de huevo de Xenopus y su adaptación para la selección de alto rendimiento para moduladores de moléculas pequeñas de la degradación de proteínas.

La reconstitución de la degradación de β-catenina en<em&gt; Xenopus</em&gt; Extracto de Huevo

Describimos métodos de manipulación de ovocitos inmaduros de Xenopus laevis, maduración in vitro de ovocitos a óvulos e inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo permite la degradación de algunas proteínas maternas y la sobreexpresión de genes de interés en la fertilización, por lo que es valioso para estudiar el papel de factores específicos en el desarrollo embrionario temprano.

La manipulación y<em&gt; In Vitro</em&gt; La maduración de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Los ovocitos, seguido de inyección intracitoplasmática de espermatozoides, para estudiar el desarrollo embrionario

El control de la síntesis de proteínas ocurre principalmente en la etapa de iniciación de la traducción, cuyas deficiencias están relacionadas con diversos trastornos. Para comprender mejor su etiología, describimos aquí un protocolo utilizando ovocitos de Xenopus laevis que evalúa la traducción de la transcripción mos en presencia de un mutante del factor de iniciación de la traducción eIF4G1.

Xenopus laevis como modelo para identificar Traducción Deterioro

Los mecanismos de escalamiento celular e intracelular siguen siendo esquivos. El uso de extractos de embriones de Xenopus se ha vuelto cada vez más común para dilucidar los mecanismos de regulación del tamaño de los orgánulos. Este método describe la preparación de extractos embrionarios y un nuevo ensayo de escalamiento nuclear a través del cual se pueden identificar los mecanismos de regulación del tamaño nuclear.

Un ensayo libre de células Utilizando<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embrión Extrae para estudiar los mecanismos de regulación del tamaño nuclear

Este protocolo demuestra un método basado en la fluorescencia para visualizar la vasculatura y para cuantificar su complejidad en Xenopus tropicalis . Los vasos sanguíneos pueden visualizarse minutos después de la inyección de un colorante fluorescente en el corazón de un embrión después de manipulaciones genéticas y / o farmacológicas para estudiar el desarrollo cardiovascular in vivo .

Visualización y análisis cuantitativo de la angiogénesis embrionaria<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Describimos un método para la preparación y obtención de imágenes en vivo de extractos citoplasmáticos sin diluir de huevos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparación de extracto de huevo y métodos de imágenes en vivo para visualizar la organización citoplasmática dinámica

Cuando las proteínas precursoras de la familia ß del factor de crecimiento transformador se expresan ectópicamente en embriones de Xenopus laevis, se dimerizan, se escindin y se secretan en el blastocele, que comienza en la etapa de blástula tardía a la gastrula temprana. Describimos un método para aspirar productos de escisión de la cavidad del blastocoele para el análisis de inmunoblot.

Análisis de los productos de escisión familiar del factor de crecimiento transformador ß secretados en el blastocoele de los embriones de Xenopus laevis

Aprenda a obtener y desenjutar huevos de Xenopus laevis mediante inducción hormonal con gonadotropina coriónica humana. Este protocolo garantiza la calidad de los ovocitos para estudios de biología celular y desarrollo.

La obtención de huevos de Xenopus laevis mujeres

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