Name: Preparación y fraccionamiento de los extractos de huevo Xenopus laevis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprende a preparar y fraccionar extractos de huevo de Xenopus laevis mediante lisis y centrifugación diferencial. Este método permite obtener fracciones citoplasmáticas y de membrana para estudiar ensamblaje nuclear y replicación del ADN in vitro.

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El protocolo de texto completo de este enfoque experimental está disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">protocolos actuales en Biología Celular</a> .

Los autores no tienen nada que revelar.

preparación y fraccionamiento de los extractos de huevo xenopus laevis

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Extractos de Xenopus huevo crudo y fraccionado se puede utilizar para proporcionar ingredientes para la reconstitución de los procesos celulares de análisis morfológicos y bioquímicos. Lisis de huevo y centrifugación diferencial se utilizan para preparar el extracto crudo que a su vez en utilizarse para preparar extractos fraccionados y preparados ligeros membrana.

Preparación y fraccionamiento de los extractos de huevo Xenopus laevis

Los extractos crudos y fraccionados de ovocitos de Xenopus pueden utilizarse para proporcionar los componentes necesarios para la reconstitución de procesos celulares con fines morfológicos y bioquímicos...

En un video anterior, demostramos cómo obtener y desjelar huevos de XUS labis maduras. Los extractos crudos de estos huevos proporcionan una fuente útil de material citoplasmático y de orgánulos para la reconstrucción in vitro de eventos celulares como el ensamblaje nuclear, la importación de proteínas nucleares y la replicación del ADN. Hola, me llamo Marie Cross y soy estudiante de posgrado en el laboratorio de la Dra. Maureen Power, del Departamento de Biología Celular de la Universidad de Emory en Atlanta, Georgia.Hoy les mostraremos cómo fraccionar un extracto de huevo en fracciones citoplasmáticas solubles y de membrana ligera. Este procedimiento incluye los siguientes pasos: lisar los huevos, recolectar los extractos crudos, fraccionar los extractos crudos de huevo, recolectar el extracto citoplasmático y recolectar la fracción de membrana ligera del extracto de huevo. Así que comencemos.Comencemos por lisar los huevos y recolectar extractos crudos antes de la lisis de los huevos. Se debe fabricar una pipeta de transferencia rompiendo una pipeta Pasteur e insertando cuidadosamente el extremo roto en una perilla de pipeteo. Transfiera los huevos a un tubo de polipropileno de

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Investigación

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Biología

Los huevos de Xenopus laevis intacta, lisadas y / o fraccionados son útiles para una amplia variedad de experimentos. Este protocolo muestra cómo inducir a la puesta de huevos, recoger y dejelly los huevos, y ordenar los huevos para eliminar los huevos dañados.

La obtención de huevos de Xenopus laevis mujeres

Ensamblaje membrana nuclear es un paso esencial en el ciclo de división celular, proceso que puede ser replicado en el tubo de ensayo por la combinación de la cromatina espermática de Xenopus, el citosol y la membrana fracciones ligeras. Núcleos completos están formados, incluyendo las membranas nucleares con los complejos de los poros, y estos núcleos son capaces de reconstituir el proceso normal nuclear.

En la Asamblea Vitro nucleares utilizando fraccionado extractos de huevo Xenopus

Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la microscopía confocal.

Células vivas, imágenes y análisis cuantitativo de las células epiteliales embrionarias en Xenopus laevis</em

Este protocolo de vídeo se muestra un método para la generación de...

La producción de transgénicos Xenopus laevis Integración mediada por la enzima de restricción y transferencia nuclear

Xenopus huevo extracto es un sistema modelo útil para investigar el punto de control de daño en el DNA. Este protocolo es para la preparación de extractos de huevo de Xenopus y reactivos de punto de control de daño de ADN que inducen. Estas técnicas son adaptables a una variedad de enfoques que dañan el ADN en el estudio de la señalización de punto de control de daño de ADN.

Estudio del Checkpoint Daño del ADN utilizando<em&gt; Xenopus</em&gt; Extractos de huevo

Producción de<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Huevos Extrae para identificar los ARN asociada a los microtúbulos

Se describe un método para el análisis de la degradación de proteínas usando radiomarcado y proteínas de fusión luciferasa-en extracto de huevo de Xenopus y su adaptación para la selección de alto rendimiento para moduladores de moléculas pequeñas de la degradación de proteínas.

La reconstitución de la degradación de β-catenina en<em&gt; Xenopus</em&gt; Extracto de Huevo

Los mecanismos moleculares de la descondensación de la cromatina mitótica altamente compactada están mal definidos. Presentamos un ensayo libre de células basado en clústeres de cromatina mitótica aislados de células HeLa y extracto de huevo de Xenopus laevis que reconstituye fielmente el proceso de descondensación in vitro.

Una célula de ensayo libre para el Estudio de la cromatina descondensación en la final de la mitosis

Los mecanismos de escalamiento celular e intracelular siguen siendo esquivos. El uso de extractos de embriones de Xenopus se ha vuelto cada vez más común para dilucidar los mecanismos de regulación del tamaño de los orgánulos. Este método describe la preparación de extractos embrionarios y un nuevo ensayo de escalamiento nuclear a través del cual se pueden identificar los mecanismos de regulación del tamaño nuclear.

Un ensayo libre de células Utilizando<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embrión Extrae para estudiar los mecanismos de regulación del tamaño nuclear

Se presenta un método para la generación de en vitro autosostenido mitotic las oscilaciones en el nivel unicelular encapsulando extractos de huevos de Xenopus laevis en microemulsiones agua en aceite.

Reconstitución de las oscilaciones del ciclo celular en microemulsiones de extractos de huevo libre de Xenopus

Describimos un método para la preparación y obtención de imágenes en vivo de extractos citoplasmáticos sin diluir de huevos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparación de extracto de huevo y métodos de imágenes en vivo para visualizar la organización citoplasmática dinámica

Aprende a preparar y fraccionar extractos de huevo de Xenopus laevis mediante lisis y centrifugación diferencial. Este método permite obtener fracciones citoplasmáticas y de membrana para estudiar ensamblaje nuclear y replicación del ADN in vitro.

Preparación y fraccionamiento de los extractos de huevo Xenopus laevis

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