Name: No específico de Sigma Ensayo de actividad de la proteasa - La caseína como sustrato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-17T09:14:00.000+00:00
Duration: 11 min 37 s
Description: Aprenda a medir la actividad de proteasas mediante el ensayo universal de Sigma usando caseína como sustrato. Este método colorimétrico cuantifica la liberación de tirosina para control de calidad en laboratorios de bioquímica.

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Antes de comenzar el ensayo, hay que asegurarse de que los siguientes reactivos se preparan correctamente: <ol><li> Una de potasio 50 mM tampón fosfato, pH 7,5. Prepare con 11,4 mg / ml de fosfato de potasio dibásico, trihidrato en agua purificada y ajustar el pH con HCl 1M. Esta solución se coloca a 37 ° C antes de su uso. </li><li> Un 0,65% peso / volumen caseína solución preparada mezclando 6,5 mg / ml de caseína en el tampón fosfato 50 mM de potasio. Poco a poco aumentó la temperatura de la solución con agitación suave a 80-85 º C durante unos 10 minutos hasta una dispersión homogénea se logra. Es muy importante que no hierva la solución. El pH se ajusta si es necesario con NaOH y HCl. </li><li> A 110 mM solución de ácido tricloroacético, preparado por dilución de una 1:55 acciones 6.1N con agua purificada. El ácido tricloroacético es un ácido fuerte y debe ser manejado con cuidado. </li><li> 0,5 mM de Folin y Ciolcaltea, o reactivo Folin Fenol, que es la solución que reacciona con la tirosina para generar un cambio de color mensurables que se relaciona directamente con la actividad de las proteasas. Reactivo Folin fenol es un ácido y debe manejarse con cuidado. </li><li> A 500 mM de carbonato de sodio solución preparada con 53 mg / ml de carbonato de sodio anyhydrous en agua purificada. Una solución diluyente enzima, que consta de 10 mM de tampón acetato de sodio con acetato de calcio 5 mM, pH 7,5, a 37 ° C. Esta solución es lo que usamos para disolver las muestras sólidas de la proteasa o soluciones diluidas de la enzima. </li><li> 1,1 mM de L-tirosina Solución madre del estándar. Elaborado a partir de 0,2 mg / ml de L-tirosina en agua purificada y se calienta suavemente hasta que la tirosina se disuelve. Al igual que con la caseína, no hervir esta solución. Que la norma L-tirosina para enfriar a temperatura ambiente. Esta solución se diluye aún más para hacer que nuestra curva estándar. </li><li> Proteasa solución. Inmediatamente antes de su uso, se disuelven en la solución diluyente de la proteasa enzimas preparada en el paso 6. </li></ol> Si es necesario, utilice una muestra sólida de la proteasa actividad predeterminada, que se disuelve con un diluyente de la enzima a 0,1-0,2 unidades / ml. Esta solución sirve como un control positivo para el ensayo de control de calidad y la validación de los cálculos que se realizan para determinar la actividad enzimática. Configuración del ensayo de la proteasa y las curvas de calibración <ol><li> Para comenzar este ensayo, encontramos viales adecuados que contendrá alrededor de 15 ml. Para cada enzima que se pondrá a prueba, 4 viales son necesarios. Un vial se utilizará como un espacio en blanco, y otros tres se utilizará para ensayar la actividad de tres diluciones de la proteasa. Tres diluciones son útiles en la comprobación final de los cálculos el uno contra el otro. <ol><li> Para cada conjunto de cuatro viales, añadir 5ml de nuestra solución de caseína al 0,65%. Dejar que se equilibre en un baño de agua a 37 ° C durante unos 5 minutos. </li><li> Añadir la variación de volúmenes de solución de enzima que se pondrá a prueba a tres de los viales de prueba de muestra, pero no el blanco. Mezclar por agitación e incubar a 37 ° C durante diez minutos exáctamente. La actividad de la proteasa y la liberación consiguiente de la tirosina durante este tiempo de incubación es de lo que va a ser medido y comparado entre las muestras de prueba. </li></ol></li><li> Después de esta incubación de 10 minutos, agregue el 5 ml del reactivo de TCA a cada tubo para detener la reacción. A continuación, agregue un volumen adecuado de solución de enzima a cada tubo, hasta el blanco, por lo que el volumen final de solución de enzima en cada tubo es de 1 ml. Esto se hace para tener en cuenta el valor de absorción de la enzima en sí y para asegurarse de que el volumen final en cada tubo es igual. Se incuban las soluciones a 37 ° C durante 30 minutos. Durante esta incubación de 30 minutos, es posible que desee configurar su diluciones estándar de tirosina. Use 6 viales DRAM (DRAM viales pueden ser sustituidos por tubos de polipropileno) que puede contener 8 ml. A los seis viales, añadir los 1,1 mM soluciones de tirosina de patrón con los siguientes volúmenes de la MLS: 0,05, 0,10, 0,20, 0,40, 0,50. No agregue ningún estándar de tirosina en el espacio en blanco. Niveles más bajos puede ser necesaria para las muestras de prueba impuros que los cambios sean poco de color. Una vez que la solución estándar de tirosina se ha añadido, añadir una cantidad adecuada de agua purificada a cada una de las normas para obtener un volumen de 2 ml. </li><li> Después de la incubación de 30 minutos, filtrar cada una de las soluciones de prueba y el espacio en blanco con un 0,45 m de polietersulfona filtro de jeringa. La filtración es necesaria para eliminar cualquier insolubles de las muestras. <ol><li> Añadir 2 ml de la filtración de las muestras de ensayo y en el filtrado de 4 viales de DRAM que puede contener un mínimo de 8 ml. El mismo tipo de vial en el que las normas fueron preparadas se pueden utilizar. </li><li> A todos los viales que contienen las normas y estándares en blanco, agregar 5ml de carbonato de sodio. Para obtener mejores resultados, añadir 1 ml de reactivo Folin inmediatamente después. </li><li> Agregar carbonato de sodio para regular cualquier disminución del pH creado por la adición de reactivo Folin de la. </li><li> Agregar carbonato de sodio a las muestras de prueba y test en blanco. Estas soluciones se nublan después de la adición de carbonato de sodio. Añadir el reactivo Folin es el que va a reaccionar principalmente con tirosina libre. </li><li> Mezclar los viales dram por agitación e incubar a 37 ° C durante 30 minutos. </li></ol> Después de esta incubación, se debe notar que las normas tienen una gradación de color en correlación con la cantidad de tirosina añadido, las mayores concentraciones de tirosina que aparecen más oscuras. También puedes notar el cambio de color apreciable en las muestras de nuestra prueba. 2mls de estas soluciones se filtran utilizando una jeringa de 0,45 m de polietersulfona filtro en las cubetas adecuadas. Ahora que se realiza el ensayo, se puede proceder a la espectrofotómetro para grabar nuestros valores de absorbancia. </li></ol> Medir la absorbancia y cálculo de la actividad enzimática <ol><li> La absorbancia de las muestras se mide con un espectrofotómetro con una longitud de onda de 660 nm. La trayectoria de la luz se encuentra a 1 cm. Registre los valores de absorbencia de los estándares, en blanco estándar, las muestras de prueba diferentes, y en blanco de ensayo. Una vez que todos los datos han sido recogidos, la curva estándar se pueden crear. Con el fin de generar la curva, la diferencia en la absorbancia entre el blanco estándar y debe ser calculado. Este es el valor de absorbancia atribuible a la cantidad de tirosina en las soluciones estándar. Después de este cálculo simple, crear la curva estándar utilizando un programa de graficación para trazar el cambio de absorbancia de los estándares en el eje Y, frente a la cantidad de micromoles por cada uno de los cinco niveles en el eje X. <table style="width: 416px; height: 118px;" border="0"><tbody><tr><th style="text-align:center"> Volumen de estándar tirosina </th><th style="text-align:center"> uMoles tirosina </th></tr><tr><td style="text-align:center"> 0.05 </td><td style="text-align:center"> 0.055 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0.10 </td><td style="text-align:center"> 0.111 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0.20 </td><td style="text-align:center"> 0.221 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0.40 </td><td style="text-align:center"> 0.442 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0.50 </td><td style="text-align:center"> 0.553 </td></tr></tbody></table></li><li> Después de los puntos de datos han sido ingresados, generará una línea de mejor ajuste y la ecuación de la pendiente correspondiente. Buscar el cambio de absorbancia en las muestras de ensayo mediante el cálculo de la diferencia entre la absorbancia de la muestra de ensayo y la absorbancia del blanco de prueba. Insertar el valor de absorción de una de las muestras de prueba en la ecuación de la pendiente y la resolución dará lugar a la micromoles de tirosina liberada en esta reacción proteolítica particular. Para obtener la actividad de la enzima en unidades por / ml, realice el siguiente cálculo: (Umole equivalentes de tirosina liberada) x (11) Unidades / ml Enzima = __________________________________________ (1) x (10) x (2) 11 = Total de volumen (en mililitros) de ensayo 10 = Tiempo de ensayo (en minutos) de acuerdo con la definición de unidad 1 = Volumen de la enzima (en mililitros) de la enzima que se utiliza 2 = volumen (en mililitros) utilizados en la determinación colorimétrica Tome el número de equivalentes de tirosina liberada micromoles obtenidos a partir de la ecuación de la pendiente y se multiplica por el volumen total de la prueba en la MLS, que en nuestro caso es 11mls. Dividir este valor por tres otras cantidades: el tiempo del ensayo, que duró 10 minutos, el volumen de enzima utilizada en el ensayo, que fue variado (vamos a usar 1 ml), el volumen de mililitros utilizados en la detección colorimétrica, que puede variar en función de su cubeta. Se utilizó 2 ml. </li><li> Micromoles de tirosina dividido por el tiempo en minutos de medición de los rendimientos de la actividad de la proteasa llamado &quot;unidades&quot;. Podemos cancelar las unidades de medida de volumen en el numerador y el denominador, dejando una de Medidas de la actividad enzimática en términos de unidades / ml. Con el fin de determinar la actividad en una muestra de la proteasa sólido diluido en un diluyente de la enzima, dividimos nuestra actividad en las unidades / ml de la concentración de sólidos utilizados en este ensayo originalmente en mg / ml., Dejándonos con la actividad en términos de unidades / mg . Unidades / ml de enzima Unidades / mg sólido = _____________________ mg sólidos / ml enzima </li></ol>

<ol><li>Anson, M. L. J. Gen. Physiol. 22, 79-89 (1938).</li>
<li>Folin, O., Ciocalteau, V. J. Biol. Chem. 73, 627- (1929).</li>
</ol>

Acabamos mostrado cómo analizar la actividad de la proteasa utilizando universales de Sigma ensayo de actividad de la proteasa. Además, este ensayo es útil para asegurar que nuestros proteasas se han determinado con precisión la actividad antes de que usted los reciba para sus experimentos. Como se ha visto, cuando se hace este procedimiento, es de suma importancia recordar que el calor tanto de la caseína y las soluciones de tirosina lentamente y no a hervir. Además, es fundamental para preparar los espacios en blanco diferente para ambos sus estándares y para cada muestra de prueba que usted tiene.

<table><tbody><tr><td>Proteasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4630</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato potásico, dibásico, trihidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5504</td><td></td></tr><tr><td>Caseína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7078</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0699</td><td></td></tr><tr><td>Folin &amp;amp; Reactivo de fenol de Ciocalteu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9252</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato de sodio, anhidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2127</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de sodio, trihidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8625</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1000</td><td></td></tr><tr><td>L-tirosina, base libre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3754</td><td></td></tr><tr><td>Protease Profiler Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PP0500</td><td></td></tr><tr><td>Kit de detección fluorescente de proteasas</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PF0100</td><td></td></tr></tbody></table>

no específico de sigma ensayo de actividad de la proteasa - la caseína como sustrato

Sigma's Non-specific Protease Activity Assay - Casein as a Substrate

Las proteasas rompen los enlaces peptídicos. En el laboratorio, a menudo es necesario medir y / o comparar la actividad de las proteasas. No específico de Sigma ensayo de actividad de la proteasa puede ser utilizado como un procedimiento normalizado para determinar la actividad de las proteasas, que es lo que hacemos en nuestros procedimientos de control de calidad. En este ensayo, la caseína actúa como sustrato. Cuando la proteasa que estamos probando digiere la caseína, el aminoácido tirosina es liberado junto con otros aminoácidos y fragmentos peptídicos. Reactivo de Folin y Ciocalteus fenol, o Folin es principalmente reacciona con la tirosina libre para producir un cromóforo de color azul, que es cuantificable y se mide como un valor de absorbancia en el espectrofotómetro. La tirosina más que se libera de la caseína, más los cromóforos que se generan y más fuerte es el de la actividad de la proteasa. Los valores de absorción que genera la actividad de la proteasa se compara con una curva patrón, que se genera mediante la reacción de cantidades conocidas de la tirosina con el reactivo FC correlacionar los cambios en la absorbancia con la cantidad de tirosina en micromoles. De la curva estándar de la actividad de las muestras de la proteasa se puede determinar en términos de unidades, que es la cantidad de micromoles de equivalentes de tirosina liberada de la caseína por minuto. Para ver este artículo en chino, <a href="http://jove.com/index/details.stp?ID=910">haga clic aquí</a>

Las proteasas rompen los enlaces peptídicos. En el laboratorio, a menudo es necesario medir y / o comparar la actividad de las proteasas. No específico de Sigma ensayo de actividad de la proteasa puede ser utilizado como un procedimiento normalizado para determinar la actividad de las proteasas.

No específico de Sigma Ensayo de actividad de la proteasa - La caseína como sustrato

Las proteasas rompen los enlaces peptídicos. En el laboratorio, a menudo es necesario medir y/o comparar la actividad de las proteasas. La proteasa no específica de Sigma...

Las proteasas rompen los enlaces peptídicos en el laboratorio. A menudo es necesario medir o comparar la actividad de las proteasas de Sigma. El ensayo universal de actividad proteásica puede utilizarse como un procedimiento estandarizado para determinar la actividad de las proteasas, lo cual es lo que hacemos durante nuestros procedimientos de control de calidad.En este ensayo, la casiana actúa como sustrato cuando la proteasa que estamos probando digiere la casiana. Se libera el aminoácido tirosina junto con otros aminoácidos y fragmentos peptídicos. La tirosina libre reacciona entonces con el reactivo de Folin-Ciocalteu o reactivo de Folin para producir un cromóforo de color azul, que es cuantificable y se mide como un valor de absorbancia en el espectrofotómetro.Cuanta más tirosina se libere de la caseína, mayor será la generación de cromóforos y más intensa será la actividad de la proteasa. Los valores de absorbancia generados por la actividad de la proteasa se comparan con una curva patrón, que se obtiene al hacer reaccionar cantidades conocidas de tirosina con el reactivo FC para correlacionar los cambios en la absorbancia. A partir de la cantidad de tirosina en micromoles obtenida mediante la curva patrón, se puede determinar la actividad de las muestras de proteasa en unidades, que corresponden a la cantidad de micromoles de equivalente de tirosina liberados de la caseína por minuto. Hola, mi nombre es Carrie Cup Vineyard y soy científica en nuestras instalaciones Sigma Aldridge DeKalb aquí en St. Louis, Missouri.Hoy, les mostraré un método universalmente aplicable para evaluar la actividad de proteasas en Sigma Aldridge. Utilizamos principalmente este ensayo en nuestra área de control de calidad para asegurarnos de que nuestra proteasa tenga actividad suficiente antes de enviarla directamente a su laboratorio. Antes de comenzar el ensayo, debemos asegurarnos de que los siguientes reactivos estén correctamente preparados.Un tampón de fosfato de potasio 50 milimolar, pH 7,5. La solución se coloca a 37 grados Celsius antes de usar. Una solución de kasian al 0,65 % peso/volumen, preparada mezclando 6,5 miligramos por mililitro en un litro. La temperatura de la solución se incrementa gradualmente con agitación suave hasta 80-85 grados Celsius durante aproximadamente 10 minutos, hasta lograr una dispersión homogénea.Es muy importante no hervir la solución. Luego, si es necesario, se ajusta el pH con hidróxido de sodio y ácido clorhídrico. Una solución de ácido tricloroacético 110 milimolar preparada diluyendo un stock 6,1 normal en una proporción de uno a 55 con agua purificada 0,5 milimolar, calts fenólicos precipitados o reactivo fenólico precipitado, que es la solución que reaccionará con la tirosina para generar un cambio de color medible.Esto estará directamente relacionado con la actividad de las proteasas. Una solución de carbonato de sodio 500 milimolar preparada con 53 miligramos por mililitro de carbonato de sodio anhidro en agua purificada, y una solución diluyente de enzima, que consiste en un tampón de acetato de sodio 10 milimolar con calcio 5 milimolar pH 7,5 a 37 grados Celsius. Esta solución es la que utilizamos para disolver muestras sólidas de proteasa o diluir soluciones enzimáticas.La solución stock estándar de L-tirosina, que debe tener una concentración inicial de 1,1 milimolar, una solución de 0,2 miligramos por mililitro de L-tirosina, se prepara en agua purificada y se calienta suavemente hasta que la tirosina se disuelve. Al igual que con la casiana, no hierva esta solución. Deje que la solución estándar de L-tirosina se enfríe a temperatura ambiente.Esta solución se diluirá aún más para elaborar nuestra curva patrón, si es necesario, utilizando una muestra sólida de proteasa con actividad predeterminada, que se disuelve en diluyente de enzima hasta alcanzar de 0,1 a 0,2 unidades por mililitro. Esta solución sirve como control positivo para el ensayo de control de calidad y como validación para los cálculos que realizaremos para determinar la actividad enzimática. Ahora que hemos preparado nuestros reactivos y todos están a la temperatura correcta, comenzaremos nuestro ensayo de proteasa.Para comenzar este ensayo, busque viales adecuados que puedan contener aproximadamente 15 mililitros. Para cada enzima que vaya a probar, necesitará cuatro viales. Un vial se utilizará como blanco, y otros tres se emplearán para evaluar la actividad de tres.La dilución de la proteasa en tres diluciones es útil al verificar nuestros cálculos finales entre sí; agregue a cada conjunto de cuatro viales cinco mililitros de nuestra solución al 0,65 % de kasiana y déjelos equilibrar en un baño de agua a 37 grados Celsius durante aproximadamente cinco minutos. Luego añada concentraciones variables de nuestra solución de enzima a tres de los viales de muestra, pero no al blanco. Mézclelos agitando suavemente y incube a 37 grados Celsius durante exactamente 10 minutos.La actividad de la proteasa y la liberación consiguiente de tirosina durante este tiempo de incubación es lo que se medirá y comparará entre nuestras muestras de prueba. Después de esta incubación de 10 minutos, agregue cinco mililitros del reactivo de TCA a cada tubo. Luego se añade un volumen apropiado de solución enzimática a cada tubo, incluso al blanco, de modo que el volumen final de la solución enzimática en cada tubo sea de un mililitro.Esto se hace para tener en cuenta el valor de absorbancia de la enzima misma. Ahora incube las soluciones a 30 grados Celsius durante 30 minutos. Durante esta incubación de 30 minutos, es posible que desee preparar las diluciones del estándar de tirosina, lo cual se realiza utilizando seis viales DR.Esto puede contener fácilmente ocho mililitros en los seis viales. Se añade la solución patrón de tirosina 1,1 milimolar con los siguientes volúmenes en mililitros: 0,05, 0,1, 0,2, 0,4 y 0,5. No añada ninguna solución patrón de tirosina al blanco.Pueden ser necesarios estándares más bajos para muestras de prueba de IPU que produzcan un cambio de color mínimo. Una vez que se ha agregado la solución estándar de tirosina, añada un volumen apropiado de agua purificada a cada uno de los estándares para llevar el volumen a dos mililitros. Después de la incubación, filtre cada una de las soluciones de prueba y la muestra en blanco.Utilizando un filtro de jeringa de 0,45 micrones, se añaden entonces dos mililitros de las muestras de ensayo y del filtrado en blanco a cuatro viales DR que pueden contener al menos ocho mililitros. Puede utilizarse el mismo tipo de vial en el que se prepararon los patrones; a todos los viales que contienen los patrones y el blanco patrón se añaden cinco mililitros de carbonato de sodio, y para obtener los mejores resultados, se añade inmediatamente después el reactivo precipitado; luego se añade carbonato de sodio a nuestras muestras de ensayo y al blanco de ensayo. Observará que estas soluciones se vuelven turbias tras la adición de carbonato de sodio.Luego se añade el reactivo caído, que reaccionará con la tirosina libre. A continuación, se mezclan los viales DRAM mediante agitación suave y se incuban a 37 grados Celsius durante 30 minutos tras esta incubación. Debería observarse que los patrones presentan una gradación de color que se correlaciona con la cantidad de tirosina añadida, apareciendo las concentraciones más altas de tirosina con el color más oscuro.También puede observarse un cambio de color apreciable en nuestras muestras de prueba. Se filtran dos mililitros de estas soluciones utilizando un filtro de jeringa de 0,45 micrones y cubetas adecuadas. Ahora que hemos finalizado nuestro ensayo, procedamos al espectrofotómetro y registremos nuestros valores de absorbancia.La absorbancia de nuestras muestras se mide mediante un espectrofotómetro utilizando una longitud de onda de 660 nanómetros. La trayectoria de la luz se ajusta a un centímetro; registre los valores de absorbancia para el blanco del patrón, las diferentes muestras de ensayo y el blanco de ensayo. Una vez que se han recopilado todos los datos, estamos listos para crear nuestra curva patrón.Para generar la curva, se debe calcular la diferencia de absorbancia entre el estándar y el blanco del estándar. Este es el valor de absorbancia atribuible a la cantidad de tirosina en las soluciones estándar. Después del cálculo simple, creamos nuestra curva patrón graficando el cambio en absorbancia de nuestros estándares en el eje Y frente a la cantidad en micromoles de cada uno de nuestros cinco estándares en el eje X.Una vez que hayamos ingresado nuestros puntos de datos y generado una línea de mejor ajuste, determinamos el cambio en la absorbancia de nuestras muestras de prueba calculando la diferencia entre la absorbancia de la muestra de prueba y la absorbancia del blanco de prueba. Observando nuestra curva patrón, identificamos el valor de absorbancia de una de nuestras muestras de prueba en el eje Y. A continuación, trazamos una línea paralela al eje X y nos detenemos en el punto donde intersecta nuestra curva patrón.Luego, a partir de la coordenada X tomada en este punto, obtenemos la cantidad en micro moles de tirosina liberada durante esta reacción proteolítica particular. Para obtener la actividad de la enzima en unidades por mililitro, realice el siguiente cálculo: tome el número de micro moles de equivalentes de tirosina liberados, obtenido a partir de la curva patrón, y multiplíquelo por el volumen total del ensayo en mililitros, que en nuestro caso es de 11 mililitros. Luego divida este valor por otras tres cantidades.El tiempo del ensayo, que realizamos durante 10 minutos, el volumen de enzima utilizado en el ensayo, que se varió. Utilicemos un mililitro. El volumen de mililitros empleado en la detección clorométrica, que puede diferir según su Q vet.Utilizamos dos mililitros. Los micromoles de tirosina divididos por el tiempo en minutos nos dan nuestra medida de actividad de proteasa que denominamos unidades. Podemos cancelar las unidades de medida de volumen en el numerador y el denominador y, por lo tanto, quedamos con una medida de actividad enzimática en términos de unidades por mililitro.Con el fin de determinar la actividad en una muestra sólida de proteasa diluida en diluyente de enzima, dividimos nuestra actividad en unidades por mililitro entre la concentración del sólido utilizado originalmente en este ensayo en miligramos por mililitro, lo que nos deja con la actividad en términos de unidades por miligramo. Acabamos de mostrarle cómo analizar la actividad de la proteasa utilizando el ensayo universal de actividad de proteasa de Sigma. Como ha podido observar al realizar este procedimiento, es fundamental recordar calentar lentamente tanto las soluciones de caseína como de tirosina, y no hervirlas.Además, es fundamental preparar diferentes blancos tanto para sus estándares como para cada muestra de prueba que tenga. Eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus actividades de proteasas.

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