Name: Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Aprende a evaluar la sensibilidad y preferencia olfativa en ratones adultos mediante pruebas con papel de filtro impregnado de odorantes. Estos métodos permiten estudiar el procesamiento sensorial en neurociencia.

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Financiación: Este trabajo fue apoyado por un cuartel general Stuart &amp; Victoria beca predoctoral Quan (RSR), el premio Pioneer NIH (RAS)

Examen General de Salud Un tratamiento más completo de los exámenes de salud en general se encuentran en excelentes Jacqueline Crawley recursos fenotipo conductual, ¿qué pasa con mi ratón? 1. En primer lugar, utilice una batería modificada prueba observacional para evaluar la salud general del sujeto. La batería incluye los elementos de protocolo completo de evaluación de Samuel Irwin 2 a identificar rápidamente los temas que serán aptos para su análisis posterior. En resumen, la batería modificado identifica los animales que se encuentran físicamente anormal (por ejemplo, gravemente insuficiente o excesiva de peso, no se arreglan, disnea) o que presentan una postura anormal de locomoción, o comportamientos. Todos ellos podrían ser manifestaciones de la enfermedad. Cualquier evaluación inicial que de manera similar, los sujetos no saludables es el adecuado. También es importante tener en cuenta que los animales se utilizan con humanidad, tanto durante el examen de salud general, así como durante las pruebas posteriores. Sin anestesia o analgesia se utiliza como estas pruebas no poner en marcha procedimientos potencialmente dolorosos. Prueba de la sensibilidad olfativa Este test está diseñado para detectar una diferencia en la sensibilidad olfativa entre los dos grupos de ratones (por ejemplo, un tipo salvaje y un grupo de mutantes de los animales). En esta prueba, múltiples diluciones de un perfume se hacen. Un animal inocente entonces investiga una sola dilución del aroma y el tiempo total de exploración (a menos de 3 minutos) se registra. Diluciones múltiples de la fragancia son probados en diferentes temas, ingenuo y el tiempo total de exploración se utiliza para generar las curvas de dosis-respuesta para cada grupo de ratones. Dos investigadores deben participar en las pruebas, con una ciega a los genotipos tema y / o condición. Investigador principal <ol><li> Obtener cuatro jaulas limpias (8 x 10 x W 18 L, en pulgadas), sin ropa de cama. Alinee las cuatro jaulas en la cabina de bioseguridad. </li><li> Configurar las particiones entre cada escena con papel de filtro opaco. Colocar un cartel negro en la partición final de tal manera que las líneas laterales del lado negro y el fondo de la jaula. Cubra la parte superior de la arena con un pedazo de plexiglás transparente para permitir la luz para iluminar la arena. (A) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="Figura 1" /> (B) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="Figura 1.5" /> Figura 1. Arena Set-Up. (A) estar bien cubierto, arena vacía (b) Arena con papel de filtro sujeto y perfumadas. </li> <li> Comience habituar a los sujetos. Coloque el primer tema en la primera jaula de habituación. Después de 15 minutos, mueva el primer tema de la segunda jaula. Limpie la jaula primero con TB Quatricide. Luego, coloque la segunda asignatura en la primera jaula, limpiar. Continuar este proceso con los temas siguientes. En última instancia, cada individuo debe ser habituado en las tres jaulas antes de ser colocado en la arena (caja de cuarta y final) por otros 15 minutos de habituación antes de la prueba. </li></ol> Investigador ciego <ol><li> Hacer un número apropiado de 2 pulgadas por 2 pulgadas cuadrados de papel de filtro para las muestras de perfume. </li><li> Utilizando el aroma pre-seleccionados, debidamente diluirlo. Para las muestras hidrofóbicas tales como mantequilla de maní, el uso del petróleo como solvente, para todos los demás, el uso de agua destilada. Vortex. </li><li> Establecer un dispositivo de grabación de video digital en el otro extremo de la cabina de bioseguridad de tal manera que al final toda la jaula está en foco. Grabar un vídeo previo a garantizar los parámetros son los adecuados. </li><li> Registrar el orden en que las diluciones se pondrá a prueba, teniendo cuidado al azar el orden de los ensayos. </li><li> Individuo del registro de la basura y los números de identificación. </li><li> Una vez que el tema se ha acostumbrado durante 15 minutos en el terreno, comenzar la preparación para la primera prueba. Pipeta de la primera dilución arriba y hacia abajo en el tubo cónico que antes de pipetear en un cuadrado de papel de filtro. La superficie de papel de filtro debe cubrir de manera óptima y el 85% (aproximadamente 0,50 ml de solución). Use un Kimwipe para asegurarse de que el papel de filtro no es demasiado saturado. </li><li> Iniciar la grabación de vídeo. </li><li> Coloque el cuadrado de papel de filtro en la caja en el extremo opuesto de la posición actual del animal. </li><li> Empezar a cronometrar. </li><li> Después de 3 minutos, detenga la grabación y quitar el olor a diluirse. </li><li> Si sólo hay un olor (por ejemplo, la canela) se va a probar, eliminar la materia primera prueba de la arena. Repita los pasos 6-11 para cada animal, adecuada dilución de la esencia de cada tema. Si más de un olor se va a probar, sin embargo, no retire el sujeto de la prueba de la arena. En su lugar, empezar a cronometrar. </li><li> Adecuadamente diluir el olor siguiente con los mismos métodos que se enumeran más arriba. </li><li> Después de 1 minuto, inicie la grabación de vídeo. Coloque el cuadrado de papel de filtro con la dilución de la próxima fragancia de la jaula en el extremo opuesto de la positio actual de los animalesn. </li><li> Repita los pasos 6-13 para cada aroma, teniendo en cuenta el número de archivos de vídeo para cada ensayo. </li><li> Repita los pasos 6-14 para cada tema. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="Figura 2" /> Figura 2. Los resultados representativos para una sesión de pruebas de sensibilidad olfativa. Cada ratón, ya sea del grupo de control (Grupo A) o el grupo experimental (grupo B) fue expuesto a una de las cinco distintas diluciones de extracto de canela en papel de filtro por su parte, la sesión de tres minutos. El tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro se evalúa. Los ratones del grupo A tienen una mayor sensibilidad olfativa que los del grupo B. </li></ol> Prueba de preferencia olfativa Esta prueba está diseñada para identificar las deficiencias específicas de detección, es decir, la capacidad de detectar olores atractivo o repulsivo. El siguiente procedimiento toma libremente del protocolo de Kobayakawa, K., et al3. Una vez más, dos investigadores deben participar en las pruebas, con una ciega a los genotipos tema y / o condición. El tiempo total de exploración se registra de nuevo (al ver video) para varios olores. Los olores con un total de tiempos de exploración más que el agua se designan como &quot;atractivo&quot;, mientras que aquellos con tiempos de menos de agua que se denomina &quot;aversión&quot;. La investigadora examina si los olores mismo son &quot;atractivos&quot; o &quot;desagradable&quot; para los sujetos de prueba diferentes. Por favor, siga los pasos 1-3 en la sección de pruebas de sensibilidad olfativa para el investigador principal. Investigador ciegos El procedimiento para la prueba de preferencia olfativa es el mismo, con ligeras modificaciones de los pasos 2 y 4. Por favor, siga los pasos 1-15 en la sección de pruebas de sensibilidad olfativa para el investigador ciego, con los cambios siguientes: Para el paso 2, con los olores pre-seleccionados (una combinación de aromas atractivos y aversivo), hacen que las soluciones adecuadamente diluida de cada uno en tubos cónicos. Para las muestras hidrofóbicas tales como mantequilla de maní, el uso del petróleo como solvente, para todos los demás, el uso de agua destilada. Vortex. Para el paso 4, en lugar de grabación de la dilución a ensayar, grabar la orden de los aromas variados que se pondrá a prueba, asignaron al azar el orden de los ensayos. Esta prueba está diseñada para identificar las deficiencias específicas de detección, es decir, la capacidad de detectar olores atractivo o repulsivo. El siguiente procedimiento toma libremente del protocolo de Kobayakawa, K. et al. 3. Una vez más, dos investigadores deben participar en las pruebas, con una ciega a los genotipos tema y / o condición. El tiempo total de exploración se registra de nuevo (al ver video) para varios olores. Los olores con un total de tiempos de exploración más que el agua se designan como &quot;atractivo&quot;, mientras que aquellos con tiempos de menos de agua que se denomina &quot;aversión&quot;. La investigadora examina si los olores mismo son &quot;atractivos&quot; o &quot;desagradable&quot; para los sujetos de prueba diferentes. Por favor, siga los pasos 1-3 en la sección de pruebas de sensibilidad olfativa para el investigador principal. Investigador ciegos El procedimiento para la prueba de preferencia olfativa es el mismo, con ligeras modificaciones de los pasos 2, 4 y 13. Por favor, siga los pasos 1-15 en la sección de pruebas de sensibilidad olfativa para el investigador ciego, con los cambios siguientes: Para el paso 2, con los olores pre-seleccionados (una combinación de aromas atractivos y aversivo), hacen que las soluciones adecuadamente diluida de cada uno en tubos cónicos. Para las muestras hidrofóbicas tales como mantequilla de maní, el uso del petróleo como solvente, para todos los demás, el uso de agua destilada. Vortex. Para el paso 4, en lugar de grabación de la dilución a ensayar, grabar la orden de los aromas variados que se pondrá a prueba, asignaron al azar el orden en cada ensayo. Para el paso 13, el lugar de la plaza de papel de filtro con el olor siguiente en la jaula en el extremo opuesto de la posición actual del animal. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="Figura 3" /> Figura 3. Los resultados representativos para una sesión de pruebas de las preferencias olfativas. Cada ratón fue expuesto a cada uno de los diferentes aromas en papel de filtro por su parte, la sesión de tres minutos. El tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro se evalúa. La mantequilla de maní y vainilla son los olores atractivos (aroma tiempo de exploración&gt; agua de tiempo de exploración) y 2-metilbutirato ácido es aversivo (aroma tiempo de exploración &lt;agua de tiempo de exploración). La puntuación de las pruebas olfativas Después de adquirir toda la sensibilidad olfativa y videos preferencia, es necesario analizar el tiempo total dedicado a explorar cada dilución / olor. Tiene el investigador ciego analizar todos los videos de la coherencia. <ol><li> Vista previa de la video, teniendo en cuenta lo siguiente: a) cuando el papel de filtro se coloca en el campo, b) cuando el ratón se acerca al papel de filtro, c) cuando el ratón se investiga el papel de filtro y d) cuando han transcurrido tres minutos (a partir de cuando el filtro papel fue colocado en la arena). Saber cuándo se centran en el comportamiento del ratón hace que sea más fácil de marcar con precisión el tiempo total dedicado a explorar después de la revisión. </li><li> Revisar el video. Tenga en cuenta el momento en que el primer ratón investiga el papel de filtro (latencia). </li><li> Con un cronómetro, el tiempo de todas las investigaciones a los tres minutos de colocar el papel de filtro en la arena. El momento de la investigación se define como cualquier momento en las fosas nasales del ratón son &lt;1 mm del papel de filtro. Es importante no incluir ninguna de las veces cuando el ratón está muy cerca del papel de filtro, pero no está activamente investigando. No incluyen episodios de masticar y lamer el papel o los combates de sentarse en el papel en el tiempo de exploración total. Es necesario adherirse firmemente y constantemente a estas reglas para analizar con precisión el comportamiento olfativo. </li><li> Un tiempo récord de latencia, el tiempo total dedicado a investigar el papel de filtro y el número de archivos de vídeo. </li></ol>

<ol><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%26rsquo%3Bs+Wrong+with+my+Mouse%3F+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">What&rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , John Wiley and Sons. 42-60 (2007).</li>
<li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+observational+assessment%3A+Ia.+A+systematic%2C+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li>
<li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li>
</ol>

Las pruebas anteriores permiten la evaluación rápida y fiable de la función olfatoria básica. No debe pasarse por alto, sin embargo, que esta fiabilidad exige la adecuada selección y preparación de materias para la prueba. Los animales enfermos o incapacitados de lo contrario son a menudo sujetos inconsistentes. Además, la habituación de los sujetos de prueba es la clave. Hemos encontrado que el uso de varias jaulas durante el proceso de habituación permite que los animales se sientan cómodos con el manejo experimentado...

<table><tbody><tr><td>Ácido 2-metilbutírico</td><td>Reactivo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W269506</td><td>&lt;b&gt;Concentraciones utilizadas:&lt;/b&gt;9,16 × 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-8&lt;/sup&gt; M (en H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td></tr><tr><td>Extracto puro de vainilla</td><td>Reactivo</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Concentraciones utilizadas:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; dilución (en H2O)</td></tr><tr><td>Cremas de cacahuete (Skippy, Extra Crunchy)</td><td>Reactivo</td><td>Unilever</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Concentraciones utilizadas:&lt;/b&gt;10 % (p/v), en aceite mineral</td></tr><tr><td>Extracto de canela</td><td>Reactivo</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Concentraciones utilizadas:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; dilución (en H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td></tr><tr><td>Aceite mineral, ligero</td><td>Reactivo</td><td>Fisher Scientific</td><td>O121-1</td><td>&lt;b&gt;Concentraciones utilizadas:&lt;/b&gt;N/A</td></tr></tbody></table>

pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

El sistema olfativo de roedores es de interés creciente para los científicos, estudió, en parte, a la biología de sistemas, debido a su sistema de circuitos estereotipados, pero accesible. Además, la capacidad única de esta zona para generar nuevas neuronas durante la vida de un organismo lo convierte en un atractivo sistema para los biólogos del desarrollo y la regeneración por igual. Ese interés hace necesario un medio para una evaluación rápida, pero confiable de la función olfatoria. Muchas pruebas de la capacidad olfativa es compleja, variable o no diseñados específicamente para los ratones. Además, algunas pruebas son sensibles a los déficits de memoria, así como defectos en la capacidad olfativa, confundiendo a los resultados obtenidos. Aquí se describe una batería simple de pruebas diseñadas para detectar defectos en la sensibilidad olfativa y la preferencia. En primer lugar, una evaluación inicial de la salud en general permite la identificación de los animales adecuados para su análisis posterior. En segundo lugar, los ratones son expuestos a diferentes diluciones de los olores para determinar si hay una diferencia de umbral. En tercer lugar, los ratones se presentan con varios olores, atractivo y desagradable, que permitan la evaluación de las preferencias olfativas. Estos estudios simples que hacen la caracterización inicial de comportamiento olfativo accesible para los laboratorios de la variedad de recursos y la experiencia.

Propiedades fundamentales, sin embargo, exclusiva del sistema olfativo de roedores han llevado a su estudio cada vez mayor entre los biólogos. Una evaluación relativamente simple de su función se necesita también. A continuación se describen las pruebas sensibles para la caracterización de la sensibilidad del ratón olfativo y preferencias.

Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

El sistema olfativo de los roedores es de creciente interés para los científicos y se estudia, en parte, mediante la biología de sistemas debido a que es estereotipado, aunque accesible...

El sistema olfativo o sentido del olfato de Rodin se ha convertido en un área de investigación cada vez más popular. Para evaluar la sensibilidad olfativa, se permite que un ratón se habitúe en una jaula sin cama de viruta y luego se expone a trozos de papel de filtro que contienen concentraciones crecientes de un odorante. A continuación, se registra la cantidad de tiempo que el ratón dedica a investigar el papel de filtro.La prueba de preferencia olfativa se realiza de la misma manera exacta. Sin embargo, en lugar de aumentar las concentraciones del odorífero, se registra la cantidad de tiempo que el ratón pasa investigando diferentes odoríferos. Hola, soy Rochelle Witt del Laboratorio de la Dra. Rosalyn Siegel en el Departamento de Neurobiología de la Escuela de Medicina de Harvard.Hola, soy Jennifer Deno, también del laboratorio de Siegel. Hoy les mostraremos dos procedimientos para pruebas olfativas. Utilizamos estos procedimientos en nuestro laboratorio para estudiar la sensibilidad olfativa y la preferencia olfativa.Así que comencemos. Para iniciar el procedimiento de prueba de sensibilidad olfativa, obtenga cuatro jaulas limpias, todas sin cama. Las jaulas deben tener ocho

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El deterioro de la función olfativa es una característica común en muchos trastornos neurodegenerativos, como las enfermedades de Parkinson, Alzheimer y Huntington. En el presente artículo, describimos un conjunto de pruebas para evaluar la discriminación y detección del olfato en ratones que pueden utilizarse para medir las capacidades olfativas en modelos murinos de enfermedades neurodegenerativas.

Los ensayos olfativos para modelos de ratón de Enfermedades Neurodegenerativas

Este manuscrito describe un protocolo para examinar el sistema olfativo de los roedores. La prueba de habituación/deshabituación olfativa permitirá a los investigadores determinar si un ratón se habitúa a un olor presentado repetidamente y si el ratón demuestra deshabituación cuando se le presenta un olor nuevo.

Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

Presentamos una prueba olfativa sencilla e imparcial en ratones. Con este protocolo, la discriminación olfativa, la preferencia, la evitación y la sensibilidad a un olor nuevo en comparación con el agua se pueden evaluar en sesiones conductuales únicas. Este método está indicado para un solo experimentador y el análisis se basa en el procesamiento de vídeo asistido por ordenador.

Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

Aquí capacitamos a ratones en una tarea de aprendizaje asociativo para probar la discriminación de olor. Este protocolo permite también estudios sobre cambios estructurales inducidos por el aprendizaje en el cerebro.

Una prueba objetiva y Reproducible de aprendizaje olfativo y discriminación en ratones

Este artículo proporciona una descripción detallada de un nuevo protocolo de sesgo de juicio del ratón. También se demuestra la sensibilidad de esta tarea de excavación olfativa al estado afectivo y se discute su utilidad en diversos campos de investigación.

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Este artículo proporciona una descripción detallada de la prueba de alimentos enterrados y el experimento de discriminación social de olores para evaluar los efectos de la exposición a contaminantes ambientales inhalados en la función olfativa en ratones.

Estudio de los efectos de los contaminantes ambientales inhalados sobre la función olfativa en ratones

Este protocolo describe la construcción de un olfatómetro para experimentos de comportamiento olfativo de pasa/no pasa. Se proporcionan instrucciones paso a paso, junto con imágenes, para garantizar la construcción exitosa del olfatómetro. También se incluye información para solucionar los problemas encontrados durante el proceso.

Construcción de un olfatómetro para estudios de comportamiento olfativo de roedores

Aquí, presentamos un protocolo de una prueba de preferencia olfativa que permite la evaluación de los sesgos olfativos negativos hacia los estímulos olfativos apetitivos y aversivos en modelos de depresión en ratones.

Una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión

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