Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

El sistema olfativo o sentido del olfato de Rodin se ha convertido en un área de investigación cada vez más popular. Para evaluar la sensibilidad olfativa, se permite que un ratón se habitúe en una jaula sin cama de viruta y luego se expone a trozos de papel de filtro que contienen concentraciones crecientes de un odorante. A continuación, se registra la cantidad de tiempo que el ratón dedica a investigar el papel de filtro.

La prueba de preferencia olfativa se realiza de la misma manera exacta. Sin embargo, en lugar de aumentar las concentraciones del odorífero, se registra la cantidad de tiempo que el ratón pasa investigando diferentes odoríferos. Hola, soy Rochelle Witt del Laboratorio de la Dra. Rosalyn Siegel en el Departamento de Neurobiología de la Escuela de Medicina de Harvard.

Hola, soy Jennifer Deno, también del laboratorio de Siegel. Hoy les mostraremos dos procedimientos para pruebas olfativas. Utilizamos estos procedimientos en nuestro laboratorio para estudiar la sensibilidad olfativa y la preferencia olfativa.

Así que comencemos. Para iniciar el procedimiento de prueba de sensibilidad olfativa, obtenga cuatro jaulas limpias, todas sin cama. Las jaulas deben tener ocho pulgadas de alto por diez pulgadas de ancho por dieciocho pulgadas de largo.

Coloque las cuatro jaulas en un gabinete de seguridad biológica. A continuación, instale particiones entre cada área utilizando papel filtro opaco. Luego, coloque una cartulina negra a lo largo de la partición final de modo que forre el lateral y la base de la jaula.

Permita que la luz ilumine la arena cubriendo la parte superior de la jaula con una pieza transparente de plexiglás. Ahora comience a habituar a los sujetos a realizar esto. Coloque el primer sujeto en la primera jaula.

Después de 15 minutos, traslade al primer sujeto a la segunda jaula. Limpie la primera jaula con Quatra side tb. A continuación, coloque al segundo sujeto en la primera jaula limpia.

Continúe este proceso con los sujetos siguientes antes de la prueba. Coloque a uno de los sujetos en la cuarta jaula y hábituelo durante otros 15 minutos. En última instancia, debe haber un sujeto hábituado en cada una de las primeras tres jaulas.

Ahora estamos listos para preparar las muestras de olor. Las muestras de olor deben ser preparadas por un investigador diferente que desconozca el sujeto, los genotipos y/o las condiciones. Comience la preparación de las muestras haciendo un número adecuado de cuadrados de papel de filtro de dos pulgadas por dos pulgadas.

Luego, realice las diluciones apropiadas del aroma preseleccionado en tubos cónicos. Tenga en cuenta que diferentes líneas de ratones pueden requerir distintas diluciones del aroma para lograr una discriminación efectiva entre un grupo control y un grupo experimental. Debido a esta observación, resulta útil derivar empíricamente las diluciones adecuadas de aroma en sujetos similares al grupo control antes de proceder con la prueba experimental en ratones ingenuos. Para muestras hidrófobas, como la mantequilla de maní, utilice aceite como disolvente; para todas las demás, use otro disolvente.

Utilice un vórtice con agua destilada para asegurarse de que las diluciones se mezclen adecuadamente. A continuación, coloque un dispositivo digital de grabación de video en el extremo opuesto de la campana extractora de manera que todo el extremo de la jaula quede enfocado. Grabe un video preliminar para asegurarse de que los ajustes de la cámara sean adecuados.

En un cuaderno de laboratorio, registre el orden en que se probarán las diluciones, teniendo cuidado de aleatorizar el orden en cada ensayo. También registre la camada y los números de identificación del sujeto. Una vez que el sujeto se haya habituado durante 15 minutos en la arena, comience la preparación para el primer ensayo.

Pipetee la primera dilución hacia arriba y hacia abajo en el tubo cónico antes de transferirla a un cuadrado de papel de filtro. La superficie del papel de filtro debe estar cubierta aproximadamente en un 85%. Utilice una toalla absorbente para asegurarse de que el papel de filtro no esté excesivamente saturado.

Ahora que el papel de filtro perfumado está preparado, estamos listos para realizar el primer ensayo de sensibilidad olfativa. Para comenzar el ensayo, inicie la grabación de video. Luego, coloque el papel de filtro perfumado en la jaula en el extremo opuesto a la posición actual del animal.

Comience a contar el tiempo. Después de tres minutos, detenga la grabación y retire el olor. A continuación, vuelva a iniciar el cronómetro y prepare una segunda muestra de olor.

Después de un minuto, comience a grabar el video. Como antes, coloque la muestra de olor en la jaula en el extremo opuesto a la posición actual del animal. Repita este procedimiento para cada dilución centesimal y para cada sujeto; recuerde registrar el número del archivo de video para cada ensayo.

Ahora que le hemos mostrado la prueba de sensibilidad olfativa, continúe con la prueba de preferencia olfativa. Para la prueba de preferencia olfativa, siga el mismo procedimiento descrito para la prueba de sensibilidad olfativa, con excepción de dos pequeñas modificaciones. Primero.

En lugar de preparar múltiples diluciones de un olor preseleccionado, prepare tanto un olor atractivo como uno aversivo. Y segundo, en lugar de registrar la dilución que se probará, registre el orden de las variaciones que se probarán, aleatorizando el orden en cada ensayo. Todos los demás pasos del procedimiento son idénticos a la prueba olfativa, incluyendo la habituación de los sujetos, el uso de un investigador ciego, la aplicación del olor al papel de filtro y la grabación en video cronometrada de cada ensayo.

Una vez finalizada la prueba de preferencia olfativa, proceda a calificar las pruebas olfativas. Después de haber revisado todos los videos de sensibilidad olfativa y preferencia, puntúe el tiempo total que el sujeto pasó explorando cada dilución o enviándolos para verificar la consistencia. Haga que el investigador ciego analice los videos para realizar este análisis.

Es útil primero previsualizar el video y tomar nota de lo siguiente: cuándo se coloca el papel de filtro en la arena, cuándo el ratón se acerca al papel de filtro, cuándo el ratón investiga el papel de filtro y cuándo han transcurrido tres minutos desde que el papel de filtro se colocó inicialmente en la arena. Saber cuándo centrarse en el comportamiento del ratón facilita puntuar con precisión el tiempo total dedicado a la exploración durante la revisión; ahora, revise todo el video mientras lo evalúa. Utilice un cronómetro para medir todas las investigaciones dentro de los tres minutos posteriores a colocar el papel de filtro en la arena.

El tiempo de investigación se define como cualquier período durante el cual la nariz del ratón se encuentra a menos de un milímetro del papel filtro. Es importante no incluir ningún momento en que el ratón esté cerca del papel filtro pero no lo esté investigando activamente. No incluya episodios en los que el ratón muerda o lama el papel, ni episodios en los que se siente sobre el papel, dentro del tiempo total de exploración. Adhiérase estricta y consistentemente a estas reglas para analizar con precisión el comportamiento olfativo.

Después de revisar el video, registre el tiempo total dedicado a investigar el papel de filtro y repita el análisis para todos los videos. A continuación se muestran resultados representativos de la prueba olfativa. Este primer gráfico muestra los resultados de una sesión de entrenamiento de sensibilidad olfativa.

Cada ratón del grupo experimental grupo B o del grupo de control grupo A fue expuesto a una de cinco diluciones diferentes de extracto de canela sobre papel de filtro durante una sesión de tres minutos. Se evaluó el tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro, y este gráfico muestra los resultados de una sesión de prueba de preferencia olfativa. Cada ratón fue expuesto a cada uno de los diferentes olores sobre papel de filtro durante una sesión de tres minutos.

Se evaluó el tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro. Acabamos de mostrarle cómo probar las capacidades olfativas en el ratón adulto al utilizar estos procedimientos; es importante usar ratones ingenuos para evaluar con precisión las capacidades olfativas y no otras habilidades como el aprendizaje y la memoria. Eso es todo.

Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.