Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

El sistema olfativo o sentido del olfato de Rodin se ha convertido en un área de investigación cada vez más popular. Con el fin de probar la sensibilidad olfativa, se permite que un ratón se habitúe en una jaula sin ropa de cama y luego se expone a trozos de papel de filtro que contienen concentraciones crecientes de odorante. A continuación, se registra la cantidad de tiempo que el ratón pasa investigando el papel de filtro.

Las pruebas de preferencia olfativa se realizan exactamente de la misma manera. Sin embargo, en lugar de aumentar las concentraciones de odorante, se observa la cantidad de tiempo que el ratón pasa investigando diferentes odorantes. Hola, soy Rochelle Witt del Laboratorio de la Dra. Rosalyn Siegel en el Departamento de Neurobiología de la Facultad de Medicina de Harvard.

Hola, soy Jennifer Deno, también del Siegel Lab. Hoy te mostraremos dos procedimientos para las pruebas olfativas. Utilizamos estos procedimientos en nuestro laboratorio para estudiar la sensibilidad olfativa y la preferencia olfativa.

Así que comencemos. Para comenzar el procedimiento de prueba de sensibilidad olfativa, obtenga cuatro jaulas limpias, todas sin ropa de cama. Las jaulas deben tener ocho pulgadas de alto por 10 pulgadas de ancho por 18 pulgadas de largo.

Alinee las cuatro jaulas en un gabinete de bioseguridad. A continuación, configura particiones entre cada arena con papel de filtro opaco. A continuación, coloca una cartulina negra a lo largo de la partición final de modo que reúna el lateral y la parte inferior de la jaula.

Permita que la luz ilumine la arena cubriendo la parte superior de la jaula con una pieza transparente de plexiglás. Ahora comienza a habituar a los sujetos a hacer esto. Coloque al primer sujeto en la primera jaula.

Después de 15 minutos, mueva al primer sujeto a la segunda jaula. Limpie la primera jaula con la tb lateral de Quatra. A continuación, coloque al segundo sujeto en la primera jaula limpia.

Continúe este proceso con los sujetos subsiguientes antes de la prueba. Coloque a uno de los sujetos en la cuarta jaula y habitúrelo durante otros 15 minutos. En última instancia, un sujeto debe estar habituado en cada una de las tres primeras jaulas.

Ahora estamos listos para preparar las muestras de aroma. Las muestras olfativas deben ser preparadas por un investigador diferente que sea ciego al tema, genotipos y/o condiciones. Comience la preparación de la muestra haciendo un número apropiado de cuadrados de papel de filtro de dos pulgadas por dos pulgadas.

A continuación, realice las diluciones adecuadas del aroma preseleccionado en tubos cónicos. Tenga en cuenta que los diferentes orígenes de los ratones pueden requerir una dilución diferente del sentido para una discriminación efectiva entre un grupo de control y un grupo experimental. Debido a esta observación, nos resulta útil derivar empíricamente diluciones de aroma apropiadas en sujetos similares al grupo de control antes de proceder con las pruebas experimentales de ratones ingenuos. Para muestras hidrofóbicas como la mantequilla de maní, use aceite como solvente para todas las demás.

Use un vórtice de agua destilada para asegurarse de que la dilución se mezcle correctamente. A continuación, coloque un dispositivo de grabación de video digital en el extremo más alejado de la campana extractora de modo que todo el extremo de la jaula esté enfocado. Tome un video preliminar para asegurarse de que la configuración de la cámara sea adecuada.

En un cuaderno de laboratorio registre el orden en que se probarán las diluciones, teniendo cuidado de aleatorizar el orden en cada ensayo. También registre la camada y los números de identificación del sujeto. Una vez que el sujeto se haya habituado durante 15 minutos en la arena, comience la preparación para la primera prueba.

Pipetee la primera dilución hacia arriba y hacia abajo en el tubo cónico antes de pipetearla en un cuadrado de papel de filtro. Lo óptimo es que la superficie del papel de filtro esté cubierta en un 85%. Use una toallita Kim para asegurarse de que el papel de filtro no esté demasiado saturado.

Ahora que el papel de filtro perfumado está preparado, estamos listos para realizar la primera prueba de sensibilidad olfativa. Para comenzar la prueba, inicie la grabación de video. A continuación, coloque el papel de filtro perfumado en la jaula en el extremo opuesto a la posición actual del animal.

Empieza a cronometrar. Después de tres minutos, detenga la grabación y elimine el aroma. A continuación, vuelva a poner en marcha el temporizador y prepare una segunda muestra de aroma.

Después de un minuto, comience la grabación de video. Como antes, coloque la muestra de olor en la jaula en el extremo opuesto de la posición actual del animal. Repita este procedimiento para cada dilución de centavo y para cada sujeto, recuerde grabar el número de archivo de video para cada ensayo.

Ahora que te hemos mostrado las pruebas de sensibilidad olfativa, procede con la preferencia olfativa. Ensayo. Para pruebas de preferencia olfativa. Siga el mismo procedimiento descrito para las pruebas de sensibilidad olfativa, excepto por dos ligeras modificaciones. Uno.

En lugar de preparar diluciones múltiples de un aroma preseleccionado, prepare un aroma atractivo y aversivo. Y dos, en lugar de registrar la dilución que se va a probar, anotar el orden de los variados que se van a probar aleatorizando el orden en cada ensayo. Todos los demás pasos del procedimiento son idénticos a las pruebas olfativas, incluyendo la habituación de los sujetos, el uso de un investigador ciego, la aplicación de papel de filtro y la grabación de video cronometrada de cada ensayo.

Una vez completada la prueba de preferencia olfativa, proceda a puntuar las pruebas olfativas. Después de requerir todos los videos de sensibilidad olfativa y preferencia, anote el tiempo total que el sujeto pasó explorando cada dilución o envió para obtener consistencia. Pídale al investigador ciego que analice los videos para realizar este análisis.

Es útil obtener primero una vista previa del video y tener en cuenta lo siguiente. Cuando el papel de filtro se coloca en la arena, cuando el ratón se acerca al papel de filtro, cuando el ratón investiga el papel de filtro y cuando han transcurrido tres minutos desde el momento en que el papel de filtro se colocó inicialmente en la arena, saber cuándo centrarse en el comportamiento del ratón hace que sea más fácil anotar con precisión el tiempo total dedicado a explorar al revisarlo ahora, Revisa todo el video a medida que revisas el video. Use un cronómetro para cronometrar todas las investigaciones dentro de los tres minutos posteriores a la colocación del papel de filtro en la arena.

El tiempo de investigación se define como cualquier período de tiempo en el que la nariz del ratón está a menos de un milímetro del papel de filtro, es importante no incluir ninguno de los momentos en que el ratón está muy cerca del papel de filtro pero no lo está investigando activamente. No incluya episodios de masticar y lamer el papel, así como episodios de sentarse sobre el papel en el tiempo total de exploración. Siga estas reglas de manera estrecha y consistente para analizar con precisión el comportamiento olfativo.

Después de revisar el video, registre el tiempo total dedicado a investigar el papel de filtro, repita el análisis para todos los videos. Estos son los resultados representativos de las pruebas olfativas. Este primer gráfico muestra los resultados de una sesión de entrenamiento de la sensibilidad olfativa.

Cada ratón del grupo experimental grupo B o del grupo de control grupo A fue expuesto a una de las cinco diluciones diferentes de extracto de canela en papel de filtro durante una sesión de tres minutos. Se evaluó el tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro, y este gráfico muestra los resultados de una sesión de prueba de preferencia olfativa. Cada ratón fue expuesto a cada uno de los diferentes aromas en papel de filtro durante una sesión de tres minutos.

Se evaluó el tiempo total dedicado a explorar el papel de filtro. Acabamos de mostrarle cómo probar las habilidades olfativas en el ratón adulto al usar estos procedimientos, es importante usar ratones ingenuos para probar con precisión las habilidades olfativas y no otras habilidades como el aprendizaje y la memoria. Así que eso es todo.

Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.