Hypothèses : L’hypothèse expérimentale est que dans les tranches d’extrémités de racines qui ont été traitées avec du nocodazole, un produit chimique qui interfère avec la polymérisation microtubulaire, toutes les cellules seront arrêtées au même stade du cycle cellulaire et que dans les tranches de pointe d’oignon non traitées, toutes les différentes étapes du cycle cellulaire seront visualisées. L’hypothèse nulle est qu’il n’y aura pas de différences de mitose entre les deux groupes et que les différentes étapes du cycle cellulaire seront visualisées.
Pour vous préparer à cette expérience, vous utiliserez un oignon qui a été placé dans l’eau pendant plusieurs jours jusqu’à ce que de nouvelles pointes de racines blanches aient commencé à germer. À l’aide d’une lame de rasoir, coupez un morceau de 1 cm à l’extrémité de l’une des pointes de la racine.
Placez la tranche d’oignon dans un tube de microcentrifugation étiqueté « N » pour la condition nocodazole.
Ensuite, coupez un deuxième morceau de 1 cm de pointe de racine d’oignon et placez-le dans un tube de microcentrifugation étiqueté « C » pour la condition de contrôle.
Ajoutez 2 μL de nocodazole à 5 mg/mL à 1 mL d’eau dans le tube de microcentrifugation étiqueté N et 1 mL d’eau uniquement dans le tube étiqueté C.
Laissez les tubes contenant les pointes des racines incuber pendant 12 heures et essuyez l’espace de travail avec de l’éthanol à 70 %.
Lorsque l’incubation est terminée, réglez un bloc de chaleur à 60 ºC.
Lavez les pointes traitées au nocodazole avec de l’eau, puis aspirez le liquide.
Répétez ce lavage deux fois de plus, pour un total de trois lavages.
Remplissez les deux tubes avec 1 mL d’un acide chlorhydrique normal. Incuber les tubes dans un bloc thermique à 60 ºC pendant 12 à 15 min, puis jeter l’acide dans une fiole usagée.
Maintenant, ajoutez 1 mL d’eau distillée goutte à goutte dans les tubes au moins trois fois pour rincer les échantillons.
Ajoutez maintenant un microlitre de colorant DAPI à 10 mL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
Placez ensuite 50 μL de ce colorant DAPI dilué dans chaque tube et laissez-les incuber à température ambiante pendant 12 min.
Après cela, préformez trois lavages à l’eau distillée comme à l’étape 10.
Étiquetez une lame de microscope comme 'Contrôle' et une autre comme 'Nocodazole'.
Transférez les racines colorées sur leurs lames de microscope respectives et ajoutez une goutte d’eau sur la lame de contrôle et une goutte de nocodazole sur la lame de nocodazole.
Utilisez la lame de rasoir pour retirer les parties non tachées de chaque extrémité de racine et placez une lamelle en verre sur chaque échantillon.
Appuyez soigneusement sur chaque lamelle avec un doigt ganté, puis laissez reposer les lames pendant 10 min.
Enfin, visualisez les lames sous l’objectif 40X d’un microscope à fluorescence et capturez des images de vos préparations de cellules de pointe de racine.
