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L’hypothèse expérimentale est que dans les tranches d’extrémités de racines qui ont été traitées avec du nocodazole, un produit chimique qui interfère avec la polymérisation microtubulaire, toutes les cellules seront arrêtées au même stade du cycle cellulaire et que dans les tranches de pointes d’oignon non traitées, toutes les différentes étapes du cycle cellulaire seront visualisées. L’hypothèse nulle est qu’il n’y aura pas de différences de mitose entre les deux groupes et que les différentes étapes du cycle cellulaire seront visualisées. Pour vous préparer à cette expérience, vous utiliserez un oignon qui a été placé dans l’eau pendant plusieurs jours jusqu’à ce que de nouvelles pointes de racines blanches aient commencé à germer.
Utilisez une lame de rasoir pour couper un morceau d’un centimètre à l’extrémité de l’une des pointes de la racine. Placez la tranche d’oignon dans un tube de microcentrifugation étiqueté N pour la condition nocodazole. Ensuite, coupez un deuxième morceau d’un centimètre de racine d’oignon et placez-le dans un tube de microcentrifugation étiqueté C pour la condition de contrôle.
Ajoutez deux microlitres de cinq milligrammes par millilitre de nocodazole à un millilitre d’eau dans le tube de microcentrifugation étiqueté N et un millilitre d’eau dans le tube étiqueté C. Laissez les tubes contenant les extrémités des racines incuber pendant 12 heures et essuyez l’espace de travail avec de l’éthanol à 70 %. Lorsque l’incubation est terminée, réglez un bloc de chaleur à 60 degrés Celsius. Lavez les pointes traitées au nocodazole avec de l’eau, puis aspirez le liquide.
Répétez ce lavage deux fois pour un total de trois lavages. Remplissez les deux tubes avec un millilitre d’un acide chlorhydrique normal. Incuber les tubes dans un bloc thermique à 60 degrés Celsius pendant 12 à 15 minutes, puis jeter l’acide dans une fiole usagée et ajouter un millilitre d’eau distillée goutte à goutte dans les tubes au moins trois fois pour rincer les échantillons.
Ajoutez maintenant un microlitre de colorant DAPI à 10 millilitres de solution saline tamponnée au phosphate. Placez ensuite 50 microlitres de colorant DAPI dilué dans chaque tube et laissez-les incuber à température ambiante pendant 12 minutes. Après cette préforme, trois lavages à l’eau distillée viennent d’être démontrés.
Étiquetez une lame de microscope comme témoin et une autre comme nocodazole. Transférez les racines colorées sur leurs lames de microscope respectives et ajoutez une goutte d’eau à la lame de contrôle et une goutte de nocodazole à la lame de nocodazole. Utilisez la lame de rasoir pour retirer les parties non tachées de chaque extrémité de racine et placez une lamelle en verre sur chaque échantillon.
Appuyez délicatement sur chaque lamelle avec le bout d’un doigt ganté, puis laissez reposer les lames pendant 10 minutes. Enfin, visualisez les lames sous l’objectif 40x d’un microscope optique ou fluorescent et capturez des images de vos préparations de cellules de pointe de racine. Avant que les cellules puissent passer par toutes les étapes du cycle cellulaire, elles doivent passer par plusieurs points de contrôle.
Ces points de contrôle sont régulés par les cyclines et les protéines kinases dépendantes des cyclines, ou CDK. Si les cyclines et les CDK déterminent que les événements cellulaires précédents n’ont pas été correctement terminés, ils arrêteront les cellules à cette étape et les empêcheront de proliférer. Dans les cellules cancéreuses, une ou plusieurs de ces contraintes moléculaires pour réguler la division cellulaire sont perdues, ce qui permet aux cellules endommagées d’échapper au contrôle de la prolifération cellulaire.
Ces cellules anormales se transforment en tumeurs qui sont des masses de cellules proliférantes incontrôlées qui interfèrent avec les fonctions normales du corps. Remarquez comment, avant de se diviser, cette cellule cancéreuse arrondit et réfracte la lumière très fortement sous le microscope optique. En effet, toutes les cellules cancéreuses ne se divisent pas avec succès en cellules filles après chaque cycle de mitose.
Cela signifie qu’ils contiennent souvent un excès d’organites et d’ADN et cette augmentation du contenu cellulaire signifie qu’ils réfracteront la lumière plus intensément que les cellules normales. Maintenant que toutes les données ont été collectées, examinons nos résultats. Quelles structures cellulaires peut-on identifier dans la tranche de pointe d’oignon qui a été traitée avec du nocodazole ?
Y a-t-il des cellules en mitose ? Quelles étapes de la division cellulaire voyez-vous ? Notez le pourcentage de cellules à chaque étape de la mitose dans le tableau.
Regardez ensuite la tranche de pointe d’oignon non traitée. Quelles structures cellulaires pouvez-vous identifier ? Y a-t-il des cellules en mitose ?
Quelles étapes de la division cellulaire voyez-vous ? Notez les pourcentages de cellules à chaque étape de la mitose dans le tableau. Vous aurez remarqué que la plupart des cellules de la tranche d’oignon traitée au nocodazole sont au même stade de mitose en raison des propriétés de perturbation des microtubules du réactif qui empêchent la formation des fibres du fuseau et la ségrégation des chromosomes et la division cellulaire ultérieures.
Cependant, de nombreuses étapes différentes de la mitose sont visibles dans les cellules de la tranche non traitée, car la mitose est un processus continu chez les organismes sains.
