FISH - Hybridation fluorescente in situ

L’hybridation in situ par fluorescence ou FISH est une technique utilisée pour détecter l’emplacement de gènes spécifiques ou de parties de gènes sur des chromosomes à l’intérieur de cellules fixes.

Dans cette technique, un ADN simple brin marqué par fluorescence est utilisé comme sonde pour lier des parties des chromosomes qui contiennent une séquence d’ADN complémentaire, appelée cible.

Tout d’abord, les cellules sont arrêtées en interphase ou en métaphase. Les cellules arrêtées sont suspendues dans une solution tampon et étalées sur une lame de verre propre.

Ensuite, l’ADN cible et les sondes marquées sont dénaturés par la chaleur ou des produits chimiques. Cette étape sépare l’ADN double brin, laissant à la fois la sonde et l’ADN cible sous forme de séquences simple brin capables d’appariement de bases.

Ensuite, la sonde et l’ADN cible sont mélangés et incubés pendant la nuit. Cela permet à la sonde de s’hybrider avec sa séquence complémentaire sur les chromosomes.

Une fois l’hybridation terminée, l’excès de sonde est emporté.

Si la sonde a été marquée avec un fluorophore, les emplacements de l’ADN hybride peuvent être directement visualisés avec un microscope fluorescent.

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