Article de méthode

Drosophile larvaire JNM Dissection

DOI :

10.3791/1107

⸱

4 février 2009

 ,  , 
1Department of Physiology and Cellular Biophysics, Columbia University College of Physicians and Surgeons

Dans cet article

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ce protocole démontre comment disséquer Drosophile en préparation pour l'immunohistochimie et / ou l'imagerie de la jonction neuromusculaire.

Protocole

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Avant de commencer

  1. Toutes les cultures doivent être cultivées à 25 ° C.
  2. HL3.1 tampon dissection peut être préparé à l'avance. Prenez une aliquote de 50 ml de HL3.1 et le garder sur la glace.
  3. Préparer 15 ml de formaldéhyde 3,5% frais dans HL3.1. Gardez-le sur la glace.

Dissection des larves

  1. Mettre une goutte de HL3.1 froid sur le plateau de dissection. Cela permet de garder l'animal de se dessécher et de l'étourdissement rend plus facile à travailler.
  2. Utilisation de la pince à long, sélectionnez une errance troisième stade larvaire et le placer dans la g....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La technique de dissection démontré dans cette vidéo peut être utilisée pour préparer des larves de drosophile pour une variété de techniques expérimentales. Si les balises protéine fluorescente sont présents, les larves peuvent être montés et imagé immédiatement. Sinon, immunomarquage peuvent être effectuées afin de marquer spécifiques compartiments synaptiques. En outre, l'électrophysiologie peut facilement être effectuée sur des larves disséquées afin d'évaluer le fonctionnement de la neurotransmissi.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

HL3 Tampon Dissection: (en mm) 70 NaCl, KCl 5, 0,2 CaCl2, MgCl2 20, 10 NaHCO3, 5 tréhalose, le saccharose 115, et 5 HEPES, pH 7,3.
Sylgard Plate Dissection: Mélanger doucement (pour éviter les bulles) 10h01 dans un bécher. Versez la préparation dans une boîte de Petri (toutes tailles). Autoriser Sylgard pour guérir la nuit dans 37C incubateur.

Références

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
  2. Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Demander l’autorisation de réutiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demander une autorisation

Mots-clés

Dissection de larves de Drosophiladissection de la jonction neuromusculairepr paration de la JNM de Drosophilapr paration de la paroi corporelle larvaireutilisation du tampon HL 3 1technique de retrait des organesm thode de pr servation des musclestapes de la proc dure d pinglagetapes du protocole de fixationanatomie larvaire de Drosophila

Articles connexes