Cet article décrit une technique de haute résolution spatiale et temporelle optiquement l'image mouvement d'action potentielle sur la surface de coeurs de rats perfusés de Langendorff en utilisant un colorant potentiométrique (di-8-ANEPPS).
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Cartographie optique des coeurs de rats perfusés de Langendorff
Dans cet article
Résumé
Résumé
Cartographie optique de la surface cardiaque avec sensibles au voltage colorants fluorescents est devenu un outil important pour étudier l'excitation électrique dans des modèles expérimentaux qui vont à l'échelle de cultures de cellules d'organes entiers
Protocole
Partie 1: Préparer les solutions et le système coeur isolé perfusé
- Le matin de l'expérience, L 4,0 de Krebs-Henseleit solution est préparée comme décrit précédemment [5, 6].
- 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime (BDM) est dissous dans 1,0 L de Krebs-Henseleit solution décantée du perfusat préparé à l'étape 1.1.
- Un montant supplémentaire de 150 ml de Krebs-Henseleit est retiré de la perfusat préparé à l'étape 1.1 et mélangé avec 5 mol / L di-8-ANEPPS (dilué à partir d'un 10 mmol / L des stocks dissous dans le diméthylsulfoxyde (DMSO)).
- Ces trois solutions sont transférés à chemise d'eau en verre réservoirs (Radnoti) o....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
L'ablation du cœur de rats anesthésiés doivent être effectués rapidement pour éviter une ischémie myocardique. Si la perfusion d'ischémie coronarienne ou insuffisance se produit, le coeur se développeront probablement des arythmies et peut devenir un infarctus. En outre, ces coeurs montrera insuffisante émission de fluorescence pour les enregistrements informatifs et des analyses ultérieures. Avant de charger le colorant, les cellules du myocarde doivent être adéquatement perfusés avec une solution de Krebs-Hens.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le soin des animaux et du Comité institutionnel utilisation à l'Hôpital pour enfants de Boston.
Remerciements
Ce travail est soutenu par des subventions de recherche du National Institutes of Health (HL068915; HL088206) et les contributions au Fonds de la conduction cardiaque au Centre hospitalier pour enfants de Boston.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires | |
|---|---|---|---|---|
| CardioCMOS-SM128f | Équipement | RedShirtImaging, LLC | ||
| Logiciel CardioPlex | Équipement | RedShirtImaging, LLC | ||
| Source lumineuse LED LUXEON 460-490 nm | Équipement | Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA | LXHL-PB02 | |
| Amplificateur ECG Type 689 Hugo Sachs Elektronik | Équipement | Harvard Apparatus | 730149 | |
| Miroir dichroïque 505 nm | Équipement | Semrock | FF505-SDi01-25x36 | |
| Filtre d'émission passe-haut 605 nm | Équipement | SciMedia | ||
| THT Sideways | Équipement | SciMedia | 25 BM-8 | |
| Support à rotule miniature | Équipement | Harvard Apparatus | BS4 73-0177 | |
| Jeu d'électrodes de stimulation petites | Équipement | Harvard Apparatus | BS4 73-0160 | |
| Plateforme d'isolation des vibrations BM-6 sur table | Équipement | Technology Inc., Inglewood, CA 90301 | 25 BM-6 | |
| Électrode ECG monopolaire | Équipement | Harvard Apparatus | BS4 73-0200 | |
| Pompe péristaltique SCI 400 | Équipement | Watson-Marlow Pumps Group | 401U/D1 | |
| Pompe péristaltique MasterFlex Easy Load II | Équipement | Cole-Parmer | Modèle 77201-60 | |
| Tuyau Marprene n°14 | Équipement | Watson-Marlow Pumps Group | 902.0016.016 | |
| Tuyau MasterFlex | Équipement | PharMed, Westlake, OH 44145 USA | 06485-25 | |
| Stimulateur à impulsions carrées S48 | Équipement | Grass Technologies | Modèle S48 | |
| Unité d'isolation transformateur RF SIU5 | Équipement | Grass Technologies | Modèle SIU5 | |
| Réservoir à double enceinte de 5 litres | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-5 | |
| Réservoir à double enceinte de 2 litres | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-2 | |
| Réservoir à double enceinte de 0,5 litre | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-0 | |
| Réservoir à double enceinte de 0,25 litre | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-025 | |
| Bobine de chauffage de 10 ml | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 158822 | |
| Trappe à bulles de compliance | Équipement | Radnoti Glass Technology Inc. | 130149 | |
| Cannule à déconnexion Luer | Équipement | Harvard Apparatus | 72-1444 | |
| Robinet trois voies, FLL vers MLT, sans capuchons de port | Équipement | Harvard Apparatus | BS4 72-2630 | |
| Thermomètre à thermocouple | Équipement | Cole-Parmer | WU-91100-40 | |
| Microsonde flexible Ultra Fine série IT | Équipement | PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA | IT-24P | |
| Oscilloscope Tektronix TDS 1002 | Équipement | Tektronix, Inc. | TDS 1002B | |
| Monooxime de 2,3-butanédione | Réactif | Sigma-Aldrich | B0753 | |
| Chlorhydrate de kétamine | Réactif | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Xylazine | Réactif | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| E-TOXA-CLEAN® | Réactif | Sigma-Aldrich | E9029 | |
| Di-8-ANEPPS | Réactif | Invitrogen | D-3167 |
Références
- Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
- Hucker, W. J. Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction. Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).
- Entcheva, E., Bi....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
