Des mesures répétées de la physiologie respiratoire rongeurs et prélèvement de cellules inflammatoires des voies respiratoires sont souhaitables, mais généralement pas possible. Nous décrivons ici une méthode reproductible pour intubation par voie orale souris qui permet des mesures répétées de l'hyperréactivité des voies aériennes et prélèvement de cellules inflammatoires des voies aériennes.
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Article de méthode
Une réversible, méthode non-invasive pour les mesures de résistance des voies aériennes et d'échantillonnage du liquide de lavage broncho-alvéolaire chez des souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Airway hyperréactivité (PA) des mesures et des broncho-échantillonnage liquide de lavage (BAL) sont essentielles pour les modèles expérimentaux d'asthme, mais les procédures maintes reprises d'obtenir de telles mesures dans le même animal ne sont généralement pas faisable. Ici, nous démontrons protocoles pour l'obtention de souris mesures répétées de la procréation assistée et broncho-liquide de lavage. Les souris ont été contestées par voie intranasale sept fois plus de 14 jours avec un allergène puissant ou fictive traitée. Avant le premier défi, et dans les 24 heures suivant chaque épreuve intranasale, les mêmes animaux ont été anesthésiés, intubés par voie orale et ventilés mécaniquement. Procréation assistée, évaluée en comparant les courbes dose-réponse de la résistance du système respiratoire (RRS) induite par l'augmentation des doses intraveineuses de l'acétylcholine (Ach) de chlorure entre imposture et allergènes animaux contestées, ont été déterminés. Par la suite, et par la même l'intubation, le poumon gauche a été un lavage de sorte que le dénombrement différentiel des cellules des voies respiratoires peut être effectuée. CesDes études révèlent que des mesures répétées de la procréation assistée et la collecte de liquide de LBA sont possibles à partir des mêmes animaux et que l'hyperréactivité bronchique maximale et éosinophilie des voies aériennes sont atteintes dans les 7-10 jours suivant le début du test de provocation. Cette nouvelle technique permet de réduire de façon significative le nombre de souris nécessaires à l'expérimentation longitudinale et est applicable à diverses espèces de rongeurs, des modèles de maladies des voies respiratoires et des instruments de physiologie.
Protocole
Provocation allergénique:
- Souris C57BL / 6, 4-8 semaines d'âge, sont anesthésiés dans une chambre en plexiglas étanche à l'air purgé avec un isoflurane 3,2% en vapeur d'oxygène mélange pendant 10 minutes pour atteindre profonde anesthésie générale.
- Défis allergènes par voie intranasale (45μL OVA (22,5 mg) et 7μL A. oryzae (7 mg) dans du PBS) sont administrés, chaque mardi, jeudi et dimanche, pour un total de sept demandes consécutives.
Anesthésie:
- Avant chaque test de provocation, et à la suite du défi 7, les souris sont administrés une injection intrapéritonéale de 48 mg / kg étomidate (2 m....
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Discussion
L'étude de l'asthme, et diverses autres maladies obstructives des voies aériennes, constitue un domaine actif et croissant de la recherche biomédicale. Une composante importante de l'asthme lié à la recherche expérimentale est la capacité à mesurer les variations de taille des voies aériennes dans des conditions variables. Rétrécissement des voies respiratoires excessive en réponse au défi provocateur, une fonction canonique de l'asthme et des maladies pulmonaires liées à une propriété et de l'hyperr.......
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Remerciements
Nous remercions le Dr W. Mintzer pour la suggestion de réaliser à fibre optique intubation orotrachéale. Soutenue par des subventions U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 et R01HL082487 de la National Institutes of Health.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
Airway physiologie logiciel de mesure (Rescomp) a été spécialement préparé (Millenium Premier Group, 415-519-4371).
Les données ont été analysées à l'aide d'un poste de travail PC sous Windows XP équipé d'un processeur Pentium III (Intel, Inc Santa Clara, CA) et une analogique 17 broches pour signal numérique convertisseur (National Instruments, # PC-LPM16).
Un petit animal voies respiratoires physiologie poste de travail a été spécialement assemblé (Millenium Premier Group) à l'aide des capteurs de pression disponibles dans le commerce (pièce n ° TRD5700 et TRD4510), des modules de préampli (pièce n ° MAX2270), le châssis (n ° de pièce MAX1320, le tout à partir Buxco, Inc Wilmington, Caroline du Nord ) et un pléthysmographe animaux personnalisée de petite taille.
0,5 mm de diamètre externe de fibre optique fil, connecté à une source de lumière (Cole Palmer Illuminateur, 41722 séries)
Ventilateur (Harvard Apparatus Souris Ventilateur, # 687)
10 mm, aiguille 27ga (BD Biosciences, cat. No. 309602)
Lampe chauffante
1 ml seringue (BD Biosciences, cat. No. 305109)
4 pinces (pince poney printemps 3200)
0,5 mm fil externe pour le guide de l'intubation
Hémacytomètre
Lames de microscope Superfrost / plus (chat Fisher. No. 12-550-15)
Shandon Filtre Cartes (Thermo chat. No. 5991022)
Coulissant cellule différentielle tache (chat Fisher. No. 122911)
Microscope optique (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
20 ga, 1,25 pouces, cathéters intraveineux PROTECTIV (Smith médicale)
0,5 mm en fibre optique polymère (Edmund Optics # NT02-532).
Références
- Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
- Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.
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