Microfluidiques Co-culture de cellules épithéliales et des bactéries d'enquête sur les Soluble signal médiée par des interactions

Résumé

Ce protocole décrit une microfluidique de co-culture de modèle pour la culture simultanée et localisée des cellules épithéliales et des bactéries. Ce modèle peut être utilisé pour étudier le rôle des différents signaux moléculaires solubles sur la pathogenèse ainsi que l'écran de l'efficacité des souches bactériennes probiotiques putatifs.

Résumé

La gastro-intestinal humain intestinal (GI) est un environnement unique dans lequel les cellules épithéliales intestinales et non pathogènes (commensaux) les bactéries coexistent. Il a été proposé que le microenvironnement des rencontres que l'agent pathogène dans la couche commensale est importante pour déterminer l'ampleur de la colonisation. Les méthodes de culture actuelles pour enquêter sur la colonisation des pathogènes ne sont pas bien adaptés pour enquêter sur cette hypothèse car ils ne permettent pas de co-culture de bactéries et de cellules épithéliales d'une manière qui imite le microenvironnement tractus gastro-intestinal. Nous décrivons ici un microfluidique de co-culture modèle qui permet la culture indépendante des cellules eucaryotes et les bactéries, et de tester l'effet du microenvironnement commensale sur la colonisation d'agents pathogènes. Le modèle de co-culture se manifeste par l'élaboration d'un commensal

Protocole

1. La fabrication des maîtres de silicium en utilisant la norme SU-8 photolithographie ¹ (non représenté dans cette vidéo).

1. Utiliser des méthodes standard de SU-8 photolithographie pour créer un SU-8 "maîtres" (SU-8 2050, MicroChem, Newton, MA) pour fabriquer les différents composants (PDMS de différentes épaisseurs, de co-culture de chambre) dans une salle blanche. Ces moules maître peut être fabriqué dans toute installation de microfabrication (par exemple, Stanford Microfluidique Fonderie; http://thebigone.stanford.edu/foundry/ ).
2. Avant de réplication PDMS, exposer le SU-....

Discussion

Essais classiques pour l'attachement des agents pathogènes et la colonisation d'utiliser une monocouche de cellules eucaryotes dans des plaques de culture de tissu dans lequel des agents pathogènes sont ajoutés. Ces modèles ne sont pas physiologiquement pertinents car ils n'intègrent pas un biofilm bactérien commensal développés sur les cellules eucaryotes. La simple addition d'une culture pré-cultivé des bactéries aux cellules eucaryotes est peu probable d'aboutir à cette conformation que les biofil.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
SU-8 2050	MicroChem Corp.
masque de photolithographie haute résolution (16 256 ppp)	Fineline-Imaging Inc, CO
Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridécafluorooctyl)silane	Sigma-Aldrich	77279
PDMS	Dow Corning	184 SIL ELAST KIT 0,5KG
DMEM	Thermo Fisher Scientific, Inc.	SH30002.02
centrifugeuse programmable	Laurell Tech Corp	WS0650S
aligneur de masque	Neurotronix	Q4000
gravure au plasma d'oxygène	March Plasma System, CA	CS-1701
pompe à seringue	Harvard Apparatus
Kit de viabilité/cytotoxicité Live/Dead	Invitrogen	L-3224