Sections en plastique de maintenir la morphologie des tissus vrai dans des coupes minces de tissus qui peuvent être immunocolorées avec des anticorps secondaires fluorescents, rendant cette méthode plus utile que des sections de paraffine ou congelés pour de nombreux types de tissus. La méthode de coloration, d'inclusion plastique, et le sectionnement est démontré dans cette vidéo.
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Article de méthode
Plastique Embedding et le sectionnement des embryons de Xenopus laevis
Dans cet article
Résumé
Protocole
Fixation
- Transfert des embryons entiers ou disséqués en explants MEMFA ou 3,7% FA + PBS dans un flacon à scintillation en verre de petite taille (chat Fisher # 03-339-25B). Incuber sur le flacon nutator à TA, seulement pour 2 heures, et pas plus que cela. Ne laissez pas l'embryon dans la FA pendant plus de 2 heures. D'incubation plus longue dans FA rendra plus difficile le tissu embryonnaire et entraîner une mauvaise pénétration des anticorps dans le processus de détection.
- Aspirer la plupart des FA et ajouter fixateur de Dent au sommet du flacon (4,5 ml ~). Retourner doucement le flacon pour quelques temps à s....
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Matériaux
L'anticorps primaire contre votre antigène ou épitope balises: Faire une dilution appropriée de PBT. La biotine conjugué anticorps secondaire: différents fournisseurs vendent biotine-anticorps conjugués.
Réimpressions et autorisations
