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Nature hétérogène des tissus s'est avérée être un facteur limitant dans la quantité d'informations qui peuvent être générés à partir d'échantillons biologiques, ce qui compromet les analyses en aval. Considérant les associations complexes et dynamiques cellulaires existant dans de nombreux tissus, afin de récapituler les interactions in vivo analyse approfondie moléculaires on doit être capable d'analyser les populations cellulaires spécifiques au sein de leur contexte d'origine. Laser à médiation microdissection pouvons atteindre cet objectif, permettant l'identification non ambiguë et bonne récolte de cellules d'intérêt sous visualisation microscopique direct tout en conservant l'intégrité moléculaire. Nous avons appliqué cette technologie pour analyser l'expression génique dans des zones définies du disque de développement chez la drosophile aile, ce qui représente un système modèle avantageux pour étudier le contrôle de croissance, la différenciation cellulaire et l'organogenèse. Larves disques imaginaux sont précocement subdivisé en compartiments antérieur et postérieur, dorsale et ventrale par des frontières restriction lignée. Faisant usage de l'inductible GAL4 UAS-système d'expression binaire, chacun de ces compartiments peuvent être spécifiquement étiquetés mouches transgéniques exprimant un transgène UAS-GFP sous le contrôle du pilote approprié GAL4-construire. Dans les disques transgéniques, le profilage d'expression génique de sous-ensembles distincts de cellules peut être précisément déterminé après microdissection laser médiation, en utilisant le signal GFP fluorescentes pour guider découpées au laser.
Parmi la variété d'applications en aval, nous nous sommes concentrés sur les profils de transcription ARN après localisée interférence ARN (ARNi). Avec l'avènement de l'ARNi de la technologie, la GFP étiquetage peut être couplé avec knockdown localisée d'un gène donné, permettant pour déterminer la réponse transcriptionnelle d'une population cellulaire discrète à l'inactivation des gènes spécifiques. Afin de valider cette approche, nous disséqué zones équivalentes du disque de la partie postérieure (marqué par l'expression de GFP), et la partie antérieure (sans étiquette) du compartiment à faire taire régionale dans le compartiment d'un gène P contraire exprimée de manière ubiquitaire. L'ARN a été extrait de microdissection des zones réduites au silence et unsilenced et comparative du profil d'expression génique déterminé par quantitative en temps réel RT-PCR. Nous montrons que cette méthode peut être effectivement appliquée pour la transcriptomique précise des sous-ensembles de cellules au sein des disques imaginaux chez la drosophile. En effet, tandis que la préparation du disque massifs comme source d'ARN suppose généralement l'homogénéité des cellules, il est bien connu que l'expression transcriptionnelle peut varier considérablement au sein de ces structures à la suite d'informations de position. En utilisant le signal GFP fluorescentes localisées au guide de coupe au laser, plus précis analyses transcriptionnelles peuvent être réalisées et rentable appliqué à des applications disparates, y compris les profils de transcription des lignées cellulaires distinctes au sein de leur contexte d'origine.