$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
IL-8 d'essai:
- Le mélange réactionnel comprenait les quatre composantes suivantes dans 100 ul volume final de tampon de dosage de leurs concentrations respectives. 10 ul de billes magnétiques avec des anticorps de capture à 100 billes / ul concentrations finales, 2 pl de l'IL-8 biotinylé anticorps à une concentration finale nano-gram/μl, 1 pl de streptavidine protéine fluorescente à 20 concentration finale nano-gram/μl, et 1 ul d'IL-8 cible à 0,48 pico-gram/μl. Les composants sont ajoutés un par un à la mémoire tampon de dosage et sont ensuite agité pendant 30 minutes.
- Une réaction de contrôle est préparé de la même manière sans l'IL-8 cible.
- Les réactions sont placés plus tard sans aucune séparation ou de lavage dans les cuvettes et inspectés en utilisant le système MMB.
Système de MMB:
- Placer la cuvette dans sa position entre les deux pôles électromagnétiques.
- Actionnez le courant de modulation et d'attendre 30 secondes pour permettre l'agrégation et la condensation des perles
- Mesurer le signal de l'amplificateur lock-in à l'aide d'un oscilloscope.
Les résultats représentatifs:
L'inspection visuelle des grains agrégés présenté une nette différence entre la réaction avec la cible et la réaction sans la cible. Dans toutes les réactions avec la cible, les billes ont formé un seul agrégat dense qui se déplaçait dans et hors le faisceau laser de manière à s'unir. Cependant, dans tous la réaction sans la cible, les billes sont moins regroupées et leur mouvement a été moins s'unir (voir Figure 1).
Figure 1: inspection visuelle de l'immuno-sandwich "(a) sans la cible IL-8 (b) Avec la cible d'IL-8.
L'horloge de modulation poteau (jaune) et le signal de sortie du PMT (magenta) tout en détectant 0,48 pico-grammes d'IL-8 cibles sont présentés dans la figure 1 (a). La fréquence de modulation pour chaque pôle est à 2 Hz. Toutefois, comme il était théoriquement prévu, lorsque les billes passer le faisceau laser, le PMT détecte la lumière fluorescente et il ya un pic dans la tension de sortie du PMT. Par conséquent, la fréquence de démodulation est à 4 Hz. Lorsque le signal du PMT et l'horloge doublé de modulation (à 4 Hz) sont nourris à l'écluse de l'amplificateur, le détecteur de phase sensible détecte la synchronisation et les résultats à haute tension (voir Figure 2).
Figure 2: (a) l'horloge de modulation (en jaune) et le signal de PMT (magenta) lorsque la détection 0,48 pico-grammes d'IL-8 cible. (B) Le blocage a entraîné tension de l'amplificateur à deux scans différents.
Le verrouillage de l'amplificateur n'a pas détecté de signal lorsque l'échantillon de contrôle a été testé. Ce fait, avec la différence visuelle dans l'agrégation suggère que le système MMB peut clairement identifier la présence d'IL-8 cible.