Cet article décrit les procédures d'un essai de métastases expérimentales qui est utilisé pour déterminer le potentiel métastatique de lignées cellulaires humaines de cancer.
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Dans cet article
Résumé
Résumé
Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Pour comprendre le mécanisme de métastases, un essai de métastases expérimentales a été établi en utilisant des souris immunodéficientes. Cet article définit les procédures impliquées dans cet essai, y compris la préparation des échantillons, l'injection intraveineuse, et la culture de cellules de métastases pulmonaires. Brièvement, un nombre prédéterminé de cellules cancéreuses humaines ont été préparés
Protocole
1. Préparation des échantillons
- Cultiver des cellules confluentes à ~ 70% dans leurs médias spécifiques avec des facteurs de croissance ou de FBS (par exemple, DMEM avec du FBS à 10% pour le MC-1 cellules). Aspirer des médias de la plaque et laver délicatement à plusieurs reprises avec 1 x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Aspirer PBS et ajouter 2 mL de trypsine à 0,05% en versène (0,014 g / L de rouge de phénol et 0,2 g / L d'EDTA-Na dans 1 x PBS, pH 7,2). Secouez doucement la plaque pour faciliter le détachement des c....
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Discussion
Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Elle comporte quatre grandes étapes: le détachement des cellules cancéreuses de leurs loci primaire, leur mise en circulation (intravasation), leur sortie de la circulation (extravasation), et la survie et la croissance dans un organe à distance. Métastase dans l'homme est considéré comme un processus lent et qui se manifeste souvent après des années de latence. Pour étudier sa progression en temps opportun, le test ci-dessus rela.......
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Remerciements
Ce protocole a été testé et optimisé initialement dans le laboratoire du Dr Richard Hynes (MIT). Le financement est assuré par le prix IDEA NYSTEM (à LX) et Ruth L. Kirschstein Prix national Research Service (à LX).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| SFB | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Rouge de phénol | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Bleu de trypan | Invitrogen | 15250-061 | |
| Tripsine 2,5 % | Invitrogen | 15090-046 | |
| Éthanol | Ultrapure | 200-CSGP | |
| Tubes Falcon de 50 ml | VWR international | 89039-656 | |
| Tubes microcentrifuges | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Filtre cellulaire Falcon de 70μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Tubes de culture Falcon de 5 ml | VWR international | 60818-576 | |
| Hémacytomètre | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| Seringue de 1 ml | BD Biosciences | 329650 | |
| Aiguille de calibre 30 ½ | BD Biosciences | 305106 | |
| Restriction murin | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Ciseaux chirurgicaux | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pince | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Microscope stéréoscopique | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Centrifugeuse de banc | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Références
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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Réimpressions et autorisations
