Assay Métastases expérimentales

Summary

Cet article décrit les procédures d'un essai de métastases expérimentales qui est utilisé pour déterminer le potentiel métastatique de lignées cellulaires humaines de cancer.

Abstract

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Pour comprendre le mécanisme de métastases, un essai de métastases expérimentales a été établi en utilisant des souris immunodéficientes. Cet article définit les procédures impliquées dans cet essai, y compris la préparation des échantillons, l'injection intraveineuse, et la culture de cellules de métastases pulmonaires. Brièvement, un nombre prédéterminé de cellules cancéreuses humaines ont été préparés

Protocol

1. Préparation des échantillons

1. Cultiver des cellules confluentes à ~ 70% dans leurs médias spécifiques avec des facteurs de croissance ou de FBS (par exemple, DMEM avec du FBS à 10% pour le MC-1 cellules). Aspirer des médias de la plaque et laver délicatement à plusieurs reprises avec 1 x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na ₂ HPO ₄ .7 H ₂ O, 0,2 g / L de KH ₂ PO _4, pH 7,3).
2. Aspirer PBS et ajouter 2 mL de trypsine à 0,05% en versène (0,014 g / L de rouge de phénol et 0,2 g / L d'EDTA-Na dans 1 x PBS, pH 7,2). Secouez doucement la plaque pour faciliter le détachement des c....

Discussion

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Elle comporte quatre grandes étapes: le détachement des cellules cancéreuses de leurs loci primaire, leur mise en circulation (intravasation), leur sortie de la circulation (extravasation), et la survie et la croissance dans un organe à distance. Métastase dans l'homme est considéré comme un processus lent et qui se manifeste souvent après des années de latence. Pour étudier sa progression en temps opportun, le test ci-dessus rela.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM	Invitrogen	10313-021
FBS	Hyclone	SH30088.03
HBSS	Invitrogen	14175-095
NaCl	Sigma-Aldrich	S9888
KCl	Mallinckrodt Baker Inc.	6838-04
Na2 HPO4.7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	7896-04
KH2PO4	Mallinckrodt Baker Inc.	7100-12
Rouge phénolique	Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na	EMD Millipore	4010
Bleu trypan	Invitrogen	15250-061
Trypsine 2,5 %	Invitrogen	15090-046
Éthanol	Ultrapur	200-CSGP
50 ml Falcon Tube	VWR international	89039-656
Tubes de microcentrifugation	Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70&mu ; m Filtre cellulaire	BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube	VWR international	60818-576
Hémacytomètre	Hausser Scientific	15170-208
Seringue 1 ml	BD Biosciences	329650
30 ½ ; aiguille de jauge	BD Biosciences	305106
Souris restrainer	Plas Labs Inc.	551-BSRR
Ciseaux chirurgicaux	Fisher Scientific	08-940
Pince	Fisher Scientific	08-902
Microscope de dissection	Nikon Instruments	SMZ1500
centrifugeuse de paillasse	Thermo Fisher Scientific, Inc.