Article de méthode

Analyse de l'expression génique dans l'agrile du frêne ( Agrilus planipennis) En utilisant quantitative en temps réel-PCR

DOI :

10.3791/1974

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4 mai 2010

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1Department of Entomology, The Ohio State University

Dans cet article

Résumé

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Quantitative PCR en temps réel (qRT-PCR) est un outil efficace pour diagnostiquer les niveaux d'ARNm dans les tissus des insectes et des stades de développement. Dans ce rapport, nous montrons l'utilisation de qRT-PCR pour déterminer les niveaux d'ARNm dans différents tissus des larves et les stades de développement de l'espèce d'insecte invasif, l'agrile du frêne.

Résumé

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L'agrile du frêne (AF,

Protocole

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Le protocole complet avec les différentes étapes est représenté dans l'organigramme de la figure 1. Étapes individuelles constituant dissection, extraction d'ARN, synthèse du premier brin d'ADNc et QRT-PCR sont détaillées ci-dessous.

I. Dissection des larves

  1. Avant le début de cette procédure, l'agrile du frêne émeraude lieu, ou l'agrile du frêne, de larves sur du papier absorbant humide jusqu'à ce que les dissections sont réalisées. Gardez fraîchement préparés phosphates 1X saline tamponnée, ou PBS, sur la glace pour garder le froid à travers la dissection de tampon.
  2. Pour commencer, fixer les l....

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Discussion

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Les cycles de seuil (Ct) valeur est obtenue pour chaque échantillon dans la plaque qRT-PCR. Pour faire la courbe standard, la valeur de Ct obtenues pour chaque dilution a été comploté contre le journal de sa concentration. Les valeurs de Ct pour les échantillons expérimentaux ont ensuite été reportées sur cette courbe standard de dilution en série. Quantités cibles ont été calculés à partir de différentes courbes standard généré pour chaque tissu soit expérimentation et d'expression du développement. Les valeurs d&#.......

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d'intérêt déclaré.

Remerciements

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Nous reconnaissons l'aide fournie par Lourdes Delta Antequera Arrueta (département d'entomologie, Université Ohio State / OARDC, Wooster, OH) dans la configuration de l'expérimentation. Nous remercions le Dr Thérèse Pologne (USDA, Forest Services, ORA) pour envoyer des échantillons EAB larvaire. Aide fournie par le Dr Luis Un Canas et Nuris M Acosta avec la configuration de microscope est apprécié. Le financement de ce projet a été assuré par des fonds d'État et fédéraux affectés au Centre de l'Ohio Agricultural Research and Development, The Ohio State University.

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Références

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  1. Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
  2. Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola dest....

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Mots-clés

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