La clé de la compréhension des processus morphogénétiques qui façonnent l'embryon précoce est la capacité de cellules d'image à haute résolution. Nous décrivons ici une technique de marquage des cellules individuelles ou de petits amas de cellules dans des embryons de zebrafish entier avec membrane cible protéine fluorescente verte.
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Article de méthode
L'étiquetage et l'imagerie des cellules dans le cerveau postérieur Zebrafish
Dans cet article
Avis d’erratum
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Résumé
Résumé
La clé de la compréhension des processus morphogénétiques qui façonnent l'embryon vertébré précoce est la capacité de cellules d'image à haute résolution. Dans les embryons de poisson zèbre, l'injection des résultats d'ADN plasmidique dans l'expression de la mosaïque, permettant la visualisation de cellules individuelles ou de petits amas de cellules
Protocole
1.Microinjection
- Diluer plasmide codant pour la membrane-cible Green Fluorescent Protein (mGFP, gracieuseté de Richard Harland) à une concentration de 40 ng / ml. L'ADN est préparé par linéarisation plasmide (mGFP/PCS2 +, gracieuseté de Richard Harland) purifiés en utilisant le kit Qiagen Maxi Prep. Ajout de rouge de phénol (dilué 1 / 10 volume total) à la solution est préférable de visualiser la solution. Conserver la solution d'ADN sur la glace.
- En vertu d'un stéréomicroscope, calibrer l'aiguille d'injection (90mm capillaires en verre à partir Narishinge scientifique; Cat n ° AN-GD-1) en alignant l'aiguille sur une lame de diplôme et tapotant....
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Discussion
En conclusion, les techniques de marquage décrites ici permettent une analyse simple cellule de processus morphogénétiques dans l'embryon de poisson zèbre. L'accent principal de ce protocole est sur les méthodes d'imagerie des cellules étiquetées dans le tube neural en utilisant mGFP sous le contrôle d'un promoteur ubiquitaire. Pour des applications supplémentaires de ce test d'expression transitoire de lecteurs devraient se référer à un document récent de Andersen et al. 3.
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par une subvention du NIH décerné à R. Brewster (1R01GM085290-01A1).
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Matériaux
Solutions
- Hank Stock # 1: 8,0 g de NaCl, 0,4 g de KCl dans 100 ml H 2 O dd
- Hank Stock # 2: 0,358 g de Na 2 HPO 4 anhydre, 0,60 g de KH 2 PO 4 dans 100 ml d'O 2 ddH
- Hank Stock # 4: 0,72 g de CaCl2 dans 50 ml d'O 2 ddH
- Hank Stock # 5: 1,23 g MgSO 4 x7H 2 O dans 50 ml H 2 O dd
- 1 X de tampon phosphate: 0,8% de NaCl, KCl 0,02%, 0,02 M PO4, pH 7,3
- Solution de blocage: 2% de sérum de chèvre normal, 1% d'albumine sérique bovine (BSA), diméthylsulfoxyde à 1% (DMSO)
Références
- Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish Practical approach series. , Oxford University press. (2002).
- Hong, E., Brewster, R. N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish. Development. 133, 3895-3905 (2006).
- Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M.
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Réimpressions et autorisations
Erratum
Formal Correction: Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain
Posted by JoVE Editors on 9/16/2010. Citeable Link.
A correction was made to Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain. There was an error in the authors affiliations. The authors have been corrected to:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1
1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County
2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2
1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County
