L’élimination des pupariums d’insectes : une méthode d’investigation des nymphes

Résumé

Source : Fukutomi, Y., et al. Méthodes de stadification des périodes de nymphe et de mesure de la pigmentation des ailes de Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

Cet article décrit une technique permettant d’enlever le puparium d’un insecte tout en gardant la nymphe intérieure intacte et donc apte à une investigation plus approfondie. L’exemple de protocole montre la procédure avec Drosophila guttifera ; cependant, cette technique est applicable à d’autres espèces de drosophiles.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

1. Enlever le puparium

NOTE Les pupes de drosophile sont recouvertes d’une structure appelée le puparium. Un insecte de Muscomorpha (mouches) ne perd pas sa cuticule larvaire à la nymphose ; Au lieu de cela, il durcit la cuticule après l’apolyse et l’utilise comme une couverture protectrice de la nymphe, le puparium. Une nymphe résidant à l’intérieur d’un puparium a une véritable cuticule nymphale, qui est très douce et fragile. Avant que l’apolyse n’ait lieu autour de P4(ii), l’épithélium et le puparium sont attachés ensemble, et il est donc très difficile d’enlever le puparium sans dommage. Après P5, l’ablation du puparium est laborieuse, mais utile pour l’observation morphologique et la définition des stades nymphaux. Le processus se déroule comme suit.

1. Fixez un morceau de ruban adhésif double face sur un morceau d’essuie-tout.
2. Placez une chrysalide sur le ruban adhésif double face, côté ventral vers le haut (Figure 1A).
3. Localisez l’espace entre la face antérieure du puparium et la nymphe interne. Saisissez et retirez le puparium autour de cet espace à l’aide d’une pince et exposez la face antérieure de la tête de la nymphe.
4. Insérez la pointe d’une pince en la déplaçant parallèlement à l’axe antéro-postérieur. Soulevez la pointe de la pince pour briser localement le puparium. Répétez cette action jusqu’à ce que la rupture atteigne la partie postérieure du puparium. Assurez-vous qu’un espace est également formé entre le puparium et les pattes de la nymphe, et brisez la face ventrale du puparium et minimisez les dommages à la chrysalide interne (figure 1B).
5. Après avoir cassé le puparium autant que possible, retirez la chrysalide à l’aide d’un pinceau fin (#5/0) (Figure 1C).
6. Placez la chrysalide sur un morceau de papier de soie humidifié avec du ddH₂O et placé dans une boîte de Pétri en plastique (diamètre 60 mm x hauteur 15 mm). Prenez des photos dès que possible car la chrysalide exposée est vulnérable et devient facilement sèche.
    

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Drosophila guttifera	Le Centre de stock des espèces de drosophile à l’U.C. San Diego	15130-1971.10	Drosophila guttifera, une espèce de mouche des fruits utilisée dans cet article
Ruban adhésif double face NICETACK	Nichiban	NW-15SF	Ruban adhésif double face, pour enlever le puparium
Pince Dumont #5	Outils scientifiques fins	Référence 11252-20	Pince pour enlever le puparium
Van Gogh VISUAL Pinceau	Talens, Japon	GWVR-#5/0	Pinceau, pour enlever le puparium
Stéréomicroscope	Olympe	SZX16	Stéréomicroscope, pour l’observation morphologique
appareil photo numérique	Olympe	DSE-330-A	Appareil photo numérique, pour l’imagerie
Boîte de culture tissulaire standard Falcon	Corning	353002	Boîte de Pétri en plastique (diamètre 60 mm x hauteur 15 mm)