Drosophila melanogaster (mouche des fruits)

En raison de leur grande taille et de leur organisation relativement simple, les cellules nourricières de drosophile sont parfaitement adaptées aux études d’imagerie de cellules vivantes. Cette vidéo décrit une méthode de micro-injection pour l’administration de composés exogènes dans les cellules, et le protocole présenté démontre la procédure avec des sondes oligonucléotidiques fluorescentes appelées balises moléculaires (MB) utilisées pour visualiser les transcrits d’ARNm endogènes.

L’embryon de drosophile est entouré de membranes externes protectrices. Pour accéder à l’embryon, le chorion – la plus externe des membranes – est souvent retiré. Cette vidéo décrit une méthode de déchorionisation couramment utilisée à l’aide d’hypochlorite de sodium. L’exemple de protocole illustre la procédure tout en utilisant des techniques stériles nécessaires à l’élevage d’animaux axéniques ou gnotobiotiques.

L'immunocoloration des ovocytes de la drosophile à un stade avancé peut s'avérer difficile en raison des membranes environnantes des ovocytes. Cette vidéo décrit une méthode à haut débit pour obtenir des ovocytes, leur fixation et l'élimination des membranes pour l'immunomarquage. Le protocole présenté démontre ces techniques avec des ovocytes à un stade avancé utilisés pour visualiser les différents stades de la méiose.

Cette vidéo décrit une méthode pour enlever mécaniquement le chorion et les membranes vitellines d’ovocytes de drosophile matures préalablement fixés. Le protocole présenté présente une démonstration détaillée de la procédure permettant d’obtenir des ovocytes compatibles avec les tests d’hybridation in situ fluorescents.

Cette vidéo décrit comment effectuer des micro-injections qui délivrent des réactifs dans des embryons vivants de drosophile. Les chercheurs peuvent utiliser cette méthode pour introduire des composés exogènes comme les acides nucléiques et les protéines au cours des premiers stades du développement de l’embryon. Le protocole présenté montre comment mettre en place et effectuer la procédure d’injection de n’importe quel réactif soluble – ici, une protéine fluorescente pour des expériences...

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Cette vidéo montre une méthode pour tester l’hypoxie chez les larves de drosophile en évaluant leurs capacités de creusement de terriers et de tunnels. En utilisant cette technique, les chercheurs peuvent distinguer les larves souffrant d’une privation d’oxygène de celles présentant des déficits de développement. L’exemple de protocole illustre la configuration de ce test.

Lors de la coloration des disques imaginaux de la drosophile, une dissection grossière est souvent effectuée où les disques sont exposés mais restent attachés au corps. Une fois colorés, les disques d’intérêt sont isolés et montés. L’exemple de protocole illustre une procédure de dissection et de montage du disque imaginal de l’aile.

La jonction neuromusculaire de la drosophile (JNM) est utilisée comme modèle pour étudier la morphologie et la fonction des synapses. Cette vidéo décrit les caractéristiques importantes que les chercheurs quantifient pour caractériser la JNM. L’exemple de protocole fait la démonstration d’un logiciel capable d’effectuer la quantification automatiquement.

Cette vidéo décrit l’ablation laser à deux photons des axones chez une larve de Drosophila melanogaster et un exemple de protocole pour induire une lésion et imager le site de la lésion.

Cette vidéo décrit comment préparer des filets larvaires utilisés pour visualiser les neurones sensoriels d’arborisation dendritique (da) et leurs cellules épidermiques associées. Le protocole présenté montre en détail comment retirer le tissu musculaire de la paroi corporelle tout en préservant la morphologie des cellules, ce qui améliore l'immunocoloration et la visualisation des neurones da et des cellules épidermiques autrement obscurcis.

L’hémolymphe de la drosophile sert à la fois de sang et de liquide interstitiel, circulant dans tout le corps pendant les stades larvaire et adulte. Cette vidéo décrit un protocole de collecte de l’hémolymphe larvaire afin de quantifier les cellules circulantes.

Les larves de drosophile sont sensibles à la lumière et réagissent aux changements de la lumière environnante. Cette vidéo décrit un test qui teste leur capacité à éviter la lumière, appelé test de taches lumineuses. Le protocole présenté montre comment configurer le test avec une LED de lumière bleue et montre comment enregistrer le comportement de l'animal en réponse à la rencontre avec la lumière.

Cette vidéo décrit la glande annulaire de la drosophile, une structure endocrinienne complexe importante pour la biosynthèse et la sécrétion d’ecdystéroïdes et d’autres hormones. Le protocole présenté démontre sa dissection, sa fixation et son immunomarquage.

Les larves de drosophile ont des neurones sensoriels dédiés – les nocicepteurs – dont la réponse à des stimuli thermiques potentiellement nocifs déclenche des comportements aversifs – ou dits « nocifensifs » chez l’animal. Cette vidéo décrit une méthode d’évaluation de la nociception thermique en enregistrant le comportement larvaire en réponse à l’application locale d’une sonde de chaleur sur la cuticule. Cette méthode est donc appelée dosage par sonde thermique locale.

Les mouches des fruits de la drosophile peuvent distinguer de petits changements de température et donc sélectionner des environnements avec des conditions thermiques favorables. Cette vidéo décrit un test comportemental qui teste la préférence de température des larves de drosophile sur un gradient thermique linéaire.

Cette vidéo décrit la glande lymphatique de la drosophile, le principal site d’hématopoïèse chez la larve de mouche, et montre un exemple de protocole pour disséquer et monter l’organe à des fins d’immunohistochimie et d’imagerie fluorescente.

Cet article décrit une technique permettant d’enlever le puparium d’un insecte tout en gardant la nymphe intérieure intacte et donc apte à une investigation plus approfondie. L’exemple de protocole montre la procédure avec Drosophila guttifera ; cependant, cette technique est applicable à d’autres espèces de drosophiles.

Cette vidéo décrit comment disséquer et isoler le complexe œil-cerveau des pupes de drosophile. Le protocole présenté démontre la procédure permettant d’obtenir des tissus de haute qualité, compatibles, par exemple, avec l’immunomarquage, ainsi qu’avec d’autres expériences d’expression génique.

Les muscles de vol de la drosophile sont utilisés comme système modèle pour le développement musculaire et la physiologie. Cette vidéo décrit la musculature de vol des adultes et met en évidence un protocole pour disséquer les muscles de vol indirect en développement qui conviennent au séquençage de l’ARN des nymphes.

Cette vidéo décrit un test de conditionnement classique qui teste l’apprentissage et la mémoire chez la drosophile, appelé conditionnement de parade nuptiale. L’essai est basé sur la réduction de la parade nuptiale des mâles après avoir subi un rejet par une femelle préaccouplée non réceptive. L’exemple de protocole montre une configuration pour la procédure qui peut être utilisée pour évaluer la mémoire à court et à long terme.

Cette vidéo décrit une méthode simple pour quantifier la locomotion des mouches et montre le test d’escalade effectué. Le test de montée à la mouche est un test général de la fonction motrice qui repose sur une réponse négative de la géotaxie.

Cette vidéo décrit la dissection des glandes accessoires des mouches mâles et montre un exemple dans lequel la glande isolée sera dissociée en une suspension unicellulaire.

Cette vidéo décrit l’anatomie générale de l’ovaire de la drosophile et présente une méthode de dissection des ovaires pour l’imagerie en direct ou fixe.

Cet article décrit la dissection des tubules antérieurs de Malpighi (MT) d’une mouche drosophile femelle et un exemple de protocole de Rossano et al. (2017) dans lequel les MT sont préparés pour l’imagerie en direct dans une chambre de perfusion.

Cette vidéo décrit le test de l’île, une méthode comportementale utilisée pour étudier la locomotion de la drosophile. Le protocole d’échantillonnage comporte une configuration pour le test compatible avec l’analyse d’image semi-automatisée.

Les scientifiques utilisent le protocole de durée de vie de la drosophile pour mesurer comment différentes conditions expérimentales affectent la longévité des mouches et générer des courbes de survie dans le processus pour quantifier les résultats expérimentaux. Le protocole d’échantillon présente le test appliqué pour étudier les effets sur la longévité de l’exposition à des concentrations variables de perturbateurs endocriniens, ou PE, tels que le 17-α-éthinylestradiol (EE2).

Cette vidéo décrit un test d’alimentation pour les mouches des fruits dans lequel des aliments colorés sont utilisés pour surveiller l’alimentation et l’effet que les composés ajoutés peuvent avoir sur l’activité alimentaire. L’exemple de protocole teste les effets de plusieurs perturbateurs endocriniens (PE).

Cette vidéo décrit une méthode de montage de cerveaux intacts à partir de mouches adultes sous une diapositive de pont et montre le protocole appliqué sur des cerveaux immunocolorés pour la microscopie fluorescente.

Cette vidéo décrit une méthode de criblage pour identifier les mouches Drosophila transgéniques, dont le génome a été modifié à l’aide de CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 est un puissant outil d'édition du génome qui a révolutionné la façon dont les scientifiques peuvent manipuler le génome d'un organisme. Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment identifier les mutants générés par CRISPR, dans lesquels l’insertion d’une séquence de transactivation remplace le premier exon du gène sans branche...

La microscopie électronique à balayage (MEB) est un outil puissant pour imager, principalement, les caractéristiques de surface d’un échantillon biologique. Cependant, une bonne préparation de l’échantillon est essentielle pour obtenir des images de qualité. Cette vidéo se concentre sur les étapes de déshydratation et de séchage de la préparation d’une drosophile adulte intacte pour le MEB.

Cette vidéo décrit comment enrober les têtes de drosophile dans la paraffine à l’aide de la méthode du collier, une technique qui prépare les têtes de mouches à la section en série. Les coupes de paraffine sont utilisées pour les examens histologiques de l'anatomie du cerveau et pour l'évaluation de la neurodégénérescence. Le protocole présenté montre comment plusieurs mouches peuvent être traitées en une seule préparation, augmentant ainsi l’efficacité du temps et minimisant les artefacts...

Cette vidéo décrit comment effectuer une injection de mouches adultes vivantes et comprend un exemple de protocole dans lequel des particules marquées et du bleu de trypan sont injectés dans l’abdomen des mouches pour doser la phagocytose.

Cette vidéo décrit le test de préférence gustative, une méthode comportementale utilisée pour mesurer l'attraction ou l'évitement envers les solutions colorées qui ont un goût différent en évaluant la coloration abdominale de la mouche après l'ingestion de la substance préférée. Le protocole présenté illustre la procédure utilisée pour mesurer la préférence des mouches pour les solutions de concentrations variables en saccharose.

Cette vidéo décrit le test CApillary FEeder, ou CAFE, une méthode comportementale qui mesure l’apport alimentaire et la préférence des mouches des fruits non maîtrisées. Le protocole présenté montre comment effectuer le test avec une évaporation minimale des capillaires remplis de liquide utilisés pour administrer la nourriture et suivre sa consommation.

Cette vidéo décrit comment disséquer et isoler le cerveau adulte de la drosophile – une procédure nécessaire pour visualiser l’organe, qui est autrement obscurci par la cuticule, l’œil et le tissu trachéal. L’exemple de protocole montre une démonstration détaillée produisant des préparations de haute qualité qui peuvent être utilisées pour les méthodes d’immunocoloration et d’imagerie en neurobiologie de la drosophile.

Le microbiote de la drosophile impacte le développement, l'immunité et la physiologie de l'animal. Cette vidéo décrit une méthode pour quantifier les bactéries des mouches en déterminant les unités formant des colonies à partir de préparations du corps entier. Le protocole présenté démontre la technique avec des mouches, élevées dans des conditions gnotobiotiques à l’aide de quatre espèces bactériennes.

Cette vidéo décrit une méthode pour disséquer, fixer et monter la patte adulte de la drosophile tout en préservant sa neuromusculature intacte pour l’analyse d’imagerie.

Cette vidéo décrit comment suivre librement les mouches qui marchent pour évaluer leur capacité générale de locomotion. Le protocole présenté démontre la configuration du test et l'analyse des données à l'aide d'un logiciel de suivi vidéo.

Cette vidéo décrit une méthode de construction d’un aspirateur de mouches, qui peut être utilisé pour transférer des insectes entre les enclos sans anesthésie. L’aspirateur dans le protocole d’exemple a été préparé pour une expérience visant à quantifier les comportements de toilettage...

Cette vidéo décrit l’imagerie calcique in vivo dans les neurones de la drosophile à l’aide de GCaMP. Le clip du protocole présenté montre comment enregistrer les changements de fluorescence GCaMP des neurones du corps du champignon pendant une expérience de conditionnement olfactif.

Les mouches des fruits ont un système olfactif complexe, peuvent discriminer des centaines d’odorants et utiliser leur odorat pour orienter les décisions comportementales. Cette vidéo décrit le test de l’olfactomètre à quatre voies, une méthode permettant d’étudier les réponses comportementales olfactives chez les mouches. Le clip de protocole présenté montre comment manipuler les mouches de test et quelles sont les étapes critiques lors de la réalisation du test.

L’agression est un comportement inné et l’expérience de combat antérieure affecte la stratégie de combat et l’issue des combats ultérieurs chez les mouches. Cette vidéo décrit un test utilisé pour étudier le comportement agressif de la drosophile. L'exemple de protocole présente le test effectué dans une configuration qui élimine la manipulation des mouches et réduit donc le stress des animaux, qui aurait autrement un impact sur les performances des sujets.

Cette vidéo décrit une méthode pour tester le comportement olfactif exploratoire chez la mouche des fruits, appelée le labyrinthe en Y. Le clip de protocole présenté montre comment configurer et effectuer le test.

Cette vidéo décrit le système de surveillance de l’activité de la drosophile (DAM) utilisé pour suivre l’activité locomotrice. Les chercheurs utilisent les données d’activité recueillies à partir du DAM pour étudier les rythmes circadiens chez les mouches des fruits. Le clip de protocole présenté montre comment charger des mouches dans l’appareil et enregistrer des données d’activité pour des expériences circadiennes.

L’optogénétique permet d’utiliser la lumière pour manipuler des neurones génétiquement modifiés afin d’exprimer des opsines spécifiques, des protéines sensibles à la lumière dont l’activation à la lumière déclenche un changement dans l’état du neurone. Nous décrivons ici une approche optogénétique chez la drosophile à l’aide de l’opsine Channelrhodopsin2. L'exemple de protocole comprend un test optogénétique destiné à étudier les circuits neuronaux à l'origine du comportement de fuite de la...

Dans cette vidéo, nous mettons en évidence une dissection de l’intestin adulte de la drosophile et une collection d’intestins moyens adaptés à la dissociation unicellulaire et à la FACS afin d’isoler les cellules souches intestinales.

Cette vidéo décrit le cœur adulte de la mouche, autrement appelé le vaisseau dorsal de la drosophile. Le protocole présenté présente une procédure de dissection pour les préparations de cœurs vivants.

Les femelles drosophiles choisissent entre les substrats et sélectionnent les sites qui sont attrayants pour la ponte. Cette vidéo décrit un test comportemental qui teste leur prise de décision, appelé test de préférence de ponte. Le clip présenté démontre la procédure avec une configuration personnalisée, qui permet aux chercheurs non seulement de tester le comportement de plusieurs femelles en même temps, mais est également compatible avec l’enregistrement vidéo et les configurations...