Essai d’escalade à la mouche : une méthode pour tester la locomotion générale chez Drosophila melanogaster

Résumé

Source : Gevedon, O., et al. In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit une méthode simple pour quantifier la locomotion des mouches et montre le test d’escalade effectué. Le test de montée à la mouche est un test général de la fonction motrice qui repose sur une réponse négative de la géotaxie.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Essai d’escalade (Adapté de Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valider le dosage grimpant. Dans cette étude, testez le test d’escalade basé sur la méthodologie précédemment décrite par Ali et al., en utilisant les mouches Elav^C155>UAS-Tau^R406W (présentant des taux de réussite d’escalade plus faibles) et Elav^C155>UAS-GFP (contrôle) et Elav^C155>UAS-mCherry (contrôle).
2. Retournez les mouches dans une chambre d’essai, une ligne à la fois (n’utilisez pas d’anesthésie au CO₂) et laissez-les récupérer pendant 5 min. Si le test est effectué à des jours différents, effectuez le test au même moment de la journée. Dans cette étude, tous les tests d’escalade ont été effectués dans l’après-midi pour contrôler les effets circadiens sur la locomotion.
   NOTE Évitez d’exposer les mouches à la lumière directe du soleil lors des tests ; Cela interférera avec leur capacité à grimper.
3. Tapotez de force la chambre (côté marqué vers le bas) sur un tapis de souris placé sur une surface solide 3 fois pour que toutes les mouches commencent le test par le bas. Observez la locomotion des mouches sur une période de 10 s.
4. Notez le nombre de mouches qui atteignent ou dépassent la ligne des 5 cm dans ce délai, ainsi que le nombre total de mouches testées. Répétez le protocole, en attendant 1 min entre chaque essai, pour un minimum de 3 répétitions d’essai par ligne.
   NOTE Dans la présente étude, chaque flacon contenait entre 2 et 19 mouches pour le dépistage initial (mouches mâles) et entre 6 et 21 mouches pour l’analyse du déficit en mutant des lignées femelles croisées.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
VWR® Drosophila Fial ; Étroit	VWR	75813-160
Ruban d’étiquetage de laboratoire à usage général VWR®	VWR	Référence 89097-912
Tapis de souris standard
Stéréoscope	Motique		Modèle SMZ-168
Incubateur de drosophile	VWR	Référence 89510-750
R progiciel