drosophile Dissection de glande accessoire mâle : une méthode pour isoler des cellules secondaires

Résumé

Source : Immarigeon, C., et al. Un protocole basé sur FACS pour isoler l’ARN des cellules secondaires des glandes accessoires mâles de la drosophile. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit la dissection des glandes accessoires des mouches mâles et montre un exemple dans lequel la glande isolée sera dissociée en une suspension unicellulaire.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Immarigeon et al., A FACS-based Protocol to Isolate RNA from the Secondary Cells of Drosophila Male Accessory Glands, J. Vis. Exp. (2019).

1. Solutions et préparation des matériaux

1. Préparez les solutions suivantes.
   1. Prepare Serum Supplemented Medium (SSM) : Milieu de drosophile de Schneider complété par 10 % de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur et 1 % de pénicilline-streptomycine.
   2. Préparez des aliquotes de l’enzyme trypsine 1x (p. ex., TrypLE Express Enzyme) et conservez-les à température ambiante.
   3. Prépare....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microscope binoculaire pour la dissection
Jumelles avec source lumineuse pour GFP
Bunsen
Microtubes de plastique 1,5 mL	Eppendorf
Pince à dissection fine
Sérum fœtal bovin	Gibco	Référence 10270-106	chaleur inactivée avant utilisation
Plats en verre pour la dissection
Seau à glace
P1000	Gilson
P20	Gilson
P200	Gilson
Papaïne			Stock 50U/mL
Pbs			fait maison
Pénicilline-streptomycine	Gibco	Référence 15070-063
Milieu de drosophile de Schneider	Gibco	Référence 21720-001
Tipone 1250 μL embout gradué	Starlab	S1161-1820
Tipone 200 μL pointe biseautée	Starlab	S1161-1800
Enzyme TrypLE Express	Gibco	12604013