drosophile Quantification de la jonction neuromusculaire (JNM) : une méthode pour évaluer la morphologie et la fonction synaptiques

Résumé

Source : Castells-Nobau, A., et al. Deux algorithmes pour la quantification à haut débit et multiparamétrique de la morphologie de la jonction neuromusculaire de la drosophile. J. Vis. Exp. (2017).

La jonction neuromusculaire de la drosophile (JNM) est utilisée comme modèle pour étudier la morphologie et la fonction des synapses. Cette vidéo décrit les caractéristiques importantes que les chercheurs quantifient pour caractériser la JNM. L’exemple de protocole fait la démonstration d’un logiciel capable d’effectuer la quantification automatiquement.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017).

1. Exigences préalables au traitement d’image

1. Effectuer des préparations à livre ouvert de larves errantes du troisième stade (L3), comme décrit précédemment.
2. Co-immunomarquage des terminaisons NMJ de la drosophile à l’aide d’une combinaison de deux marqueurs : Dlg-1 ou Hrp associé à Brp pour l’analyse avec « Drosophila NMJ Morphometrics », et Syt ou Csp associé à Brp assoc....

Résultats

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segmentation

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Immunomarquage			dilution
Anti-disques souris grand 1	Etudes développementales Hybridoma Bank	AFFN-DLG1-4D6	1/25 (combiné à l’aide du kit d’étiquetage Zenon Alexa Fluor 528)
Lapin anti-raifort peroxydase	RI de Jackson	Référence 323-005-021	1/500
Anti-Synaptotagmine de lapin	Cadeau d’Hugo Bellen		janv.-00
Protéine de chaîne anti-cystéine de souris	Etudes développementales Hybridoma Bank	DCSP-1(ab49)	1/10 (combiné à l’aide du kit d’étiquetage Zenon Alexa Fluor 528)
Souris anti-Bruchpilot	Etudes développementales Hybridoma Bank	NC82	janv.-50
Anti-souris chèvre Alexa Fluor 488	Technologies du vivant	N° A11029	1/200
Chèvre anti-lapin Alexa Fluor 568	Technologies du vivant	N° A11011	1/500
Kit d’étiquetage IgG1 de souris Zenon Alexa Fluor 568	ThermoFisher	Référence Z25006
Montage anti-décoloration ProLong Gold	ThermoFisher	Réf. P36930
équipement
Microscope confocal ou microscope à fluorescence	Leica SP5
Imageur Zeiss Axio
ordinateur	Mac ou Pc
logiciel
Fidji