Dépistage des modifications génomiques : une méthode pour identifier les mutants générés par CRISPR chez la drosophile

Résumé

Source : Du, L., et al. Une stratégie efficace pour générer des systèmes de transcription binaires spécifiques aux tissus chez la drosophile par édition du génome. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit une méthode de criblage pour identifier les mouches Drosophila transgéniques, dont le génome a été modifié à l’aide de CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 est un puissant outil d'édition du génome qui a révolutionné la façon dont les scientifiques peuvent manipuler le génome d'un organisme. Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment identifier les mutants générés par CRISPR, dans lesquels l’insertion d’une séquence de transactivation remplace le premier exon du gène sans branche (bnl), créant ainsi une lignée pilote spécifique du gène bnl, bnl-LexA.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Du et al., An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018).

1. Génétique et dépistage des mouches (Figure 1 et Figure 2)

1. Lorsque les embryons injectés se développent en adultes, croisez chaque mouche G₀ avec des mouches équilibreuses. Sélectionnez un équilibreur approprié pour le chromosome contenant l’allèle ciblé.
2. Anesthésez la progéniture F1 de chaque croisement G0 sur un tampon CO₂ et choisissez au hasard 10 à 20 mâles sous un stéréomicroscope. Croise....

Résultats

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tris-HCl	Sigma Aldrich	Réf. T3253	biologie moléculaire
Edta	Sigma Aldrich	E1161	biologie moléculaire
NaCl	Sigma Aldrich	Réf. S7653	biologie moléculaire
Eau ultrapure sans DNase/RNase	ThermoFisher Scientific	Référence 10977-023	biologie moléculaire
Amorces	ADN-IDT		La PCR
Protéinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	biologie moléculaire
2x PCR PreMix, avec colorant (rouge)	Sydlab	MB067-EQ2R	biologie moléculaire
MKRS/TB6B	Laboratoire Kornberg		Ligne de mouche
Station de CO2	Genesee Scientific	59-122WCU	poussée des mouches
Stéréomicroscope	Olympe	SZ-61	poussée des mouches
Pilons homogénéisants en microtubes	Fisher-Scientifique	Tél. : 03-421-217	isolement de l’ADN génomique