Discurage ganglionnaire larvaire : isolement de l’organe producteur d’hémocytes de la drosophile

Résumé

Source : Reimels, T. A. et Pfleger, C. M. Méthodes d’examen des glandes lymphatiques et des hémocytes chez les larves de drosophile. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo décrit la glande lymphatique de la drosophile, le principal site d’hématopoïèse chez la larve de mouche, et montre un exemple de protocole pour disséquer et monter l’organe à des fins d’immunohistochimie et d’imagerie fluorescente.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Reimels et Pfleger, Methods to Examination the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016).

1. Immunohistochimie des glandes lymphatiques larvaires

NOTE : La glande lymphatique est située à environ un tiers de la longueur de l’extrémité antérieure d’une larve, légèrement en dessous du cerveau sur la face dorsale. (Voir flèche dans Figure 1B.) La glande lymphatique flanque le vaisseau dorsal et est plus facilement disséquée attachée aux crochets buccaux ou au cerveau. ....

Résultats

Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Comprimés PBS	MP Biomédical	2810305
plat de dissection	Corning	Référence 7220-85
Tube de microcentrifugation	Denville	Réf. C2170
Tampon de dissection en silicone, fabriqué à partir du kit Sylgard 184	Krayden (distribué par Fisher)	NC9644388 (numéro de catalogue Fisher)	Fabriqué en boîte de Pétri en mélangeant les composants du kit élastomère Sylgard selon les instructions du fabricant.
Stéréomicroscope	Morrell Instruments (distributeur Nikon)	mna42000, mma36300	Modèles Nikon SMZ1000 et SMZ645
lingette en tissu	VWR	Référence 82003-820
forceps	Sciences de la microscopie électronique	Référence 72700-DZ
Pipette P200	Eppendorf	3120000054
Formaldéhyde	pêcheur	Réf. BP531-500
Triton	pêcheur	BP151-500
Préadolescent 20	pêcheur	Réf. BP337-500
albumine sérique bovine	Produits biologiques des montagnes Rocheuses	BSA-BSH-01K
sérum de chèvre normal	sigma	G9023-10ML
sérum d’âne normal	sigma	D9663-10ML
Éthanol à 200 degrés	VWR	V1001
Gallate de N-propyle	MP Biomédical	102747
glycérol	VWR	EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole)	pêcheur	Référence 62248
Verre de protection de microscope, 18 mm circulaire	pêcheur	Tél. : 12-545-100
lames de microscope en verre	pêcheur	Référence : 22-034-980
Plaque à 24 puits	Corning	351147
Pipette de transfert jetable	pêcheur	13-711-9 h
microscope à fluorescence	Zeiss		Axio Imager.Z1