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Comptage des unités formant colonies (UFC) : Quantifier les bactéries des corps de mouches

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Koyle, M. L., et al. Élevage de la mouche des fruits et de la drosophile melanogaster dans des conditions axéniques et gnotobiotiques. J. Vis. Exp. (2016).

Le microbiote de la drosophile impacte le développement, l'immunité et la physiologie de l'animal. Cette vidéo décrit une méthode pour quantifier les bactéries des mouches en déterminant les unités formant des colonies à partir de préparations du corps entier. Le protocole présenté démontre la technique avec des mouches, élevées dans des conditions gnotobiotiques à l’aide de quatre espèces bactériennes.

Protocole

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Ce protocole est un extrait de Koyle et al., Raising the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions, J. Vis. Exp. (2016).

1. Déchorionner les œufs et les transférer dans un régime stérile

  1. Préparez l’enceinte de biosécurité en vaporisant l’intérieur (y compris les côtés) avec de l’éthanol à 70 %. Essuyez le fond avec un mouchoir de laboratoire et stérilisez la cagoule avec une lumière UV pendant ~15 min. Stérilisez toutes les fournitures non biologiques (gobelets à échantillons, pinceau, pinces, récipient à déchets, 400 ml d’eau stérilisée et 100 ml d’hypochlorite de sodiu....

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Résultats

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Fichier de code supplémentaire : Exemples de calculs. Veuillez cliquer ici pour voir ce fichier (Clic droit pour télécharger).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Levure de bièreMP Biomedicals, LLC.903312
glucoseSigma Aldrich158968-3KG
agar-agarFisher--Lab ScientificFLY802010
Concentré de jus de raisin 100 % Welch'sWalmart ou autre épicerie9116196
Cage : Récipient de charcuterie rond translucide de 32 ozBoutique WebstaurantRéférence 999L5032Y
Couvercle de récipient de charcuterie rond translucideBoutique Webstaurant999YNL500
Bouteilles en stockGenesee Scientific32 à 130
Droso-PlugsGenesee Scientific49 à 101
Maille de nylonGenesee Scientific57 à 102
Douille en plastiqueHome Depot100404002
Capuchon de douille en plastiqueHome Depot100153897
Coupe à spécimenPartenaires MedSupplyRéférence K01-207067
Répéteur M4Eppendorf4982000322
Tubes à centrifuger de 50 mlTubes à centrifuger TrueLineTR2003
Boîtes de nourritureScientifique américainRéférence 2316-5001
Matrice de lyse D en vracMP Biomedicals, LLC.116540434
Pointes de pipette filtrante, 300 μlScientifique américainRéférence 1120-9810
PétriVente de produits de laboratoireM089303
éthanolLaboratoires Decon, INC.Référence 2701
pinceauWalmartRéférence 5133
forcepspêcheurRéférence 08-882
Eau de Javel domestique (6-8 % d’hypochlorite)Walmart550646751
Peptone universelGenesee Scientific20 à 260
Extrait de levureFisher ScientificRéf. BP1422-500
Phosphate dipotassiqueSigma AldrichP3786-1KG
Citrate d’ammoniumSigma Aldrich25102-500g
Acétate de sodiumVWRRéférence 97061-994
Sulfate de magnésiumFisher ScientificM63-500
Sulfate de manganèseSigma AldrichRéférence 10034-96-5
MRS PoudreSigma AldrichRéférence 69966-500G
Lecteur de plaques à 96 puitsBioTek (époque)Na
Tubes à centrifuger de 1,7 mlScientifique américainRéférence 1615-5500
Pointes de pipette à filtre, 1 000 μlScientifique américain1122-1830
Plaques à 96 puitsGreiner Bio-One655101
Perles en céramiqueMP Biomedicals, LLC.Référence 6540-434
Homogénéisateur de tissusMP Biomedicals, LLC.116004500
Enceinte de biosécurité de classe 1Thermo ScientificModèle 1395

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Mots-clés

Quantification des UFCHomog n isation du corps de la moucheDilutions en s rieCulture bact rienneHomog n isateur de tissusMouches gnotobiotiquesPlaque de microtitrationMesure de la DO600Comptage des colonies

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