Extraction mécanique du chorion et de la membrane vitelline : une méthode pour préparer les ovocytes de drosophile à l’observation directe

Résumé

Source : Perkins, A. T., Bickel, S. E. Utilisation de l’hybridation in situ en fluorescence (FISH) pour surveiller l’état de cohésion du bras dans les ovocytes de drosophile en prométaphase et en métaphase I. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo décrit une méthode pour enlever mécaniquement le chorion et les membranes vitellines d’ovocytes de drosophile matures préalablement fixés. Le protocole présenté présente une démonstration détaillée de la procédure permettant d’obtenir des ovocytes compatibles avec les tests d’hybridation in situ fluorescents.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Perkins et Bickel, Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2017).

1. Élimination des chorions et des membranes vitellines

REMARQUE : Voir Figure 1 pour les outils nécessaires.

1. Séparer les ovocytes à un stade avancé
   1. Ajouter 1 mL de PBSBTx dans un plat de dissection peu profond. Utilisez un P200 avec un embout enrobé de BSA pour transférer les ovaire....

Résultats

Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Albumine sérique bovine (BSA)	Fisher Scientific	BP1600-100	Préparez 10 % de stock Geler les aliquotes
10 % Triton X-100	Thermo Scientific	Référence 28314	Surfact-Amps
PBSBTx			1X PBS, 0,5 % BSA, 0,1 % Trition X-100
forceps	Dumont		#5 INOX, Biologie
Pipettes Pasteur jetables en verre 9	pêcheur	13-678-20C	Autoclave pour stériliser
Plat de dissection en verre peu profond			Sur mesure
Plat à puits profond (3 puits)	Pyrex	Référence 7223-34
Aiguille en tungstène			fait maison
Lames en verre dépoli, 25 x 75 mm	VWR Scientific	Référence 48312-002
Tubes coniques de 15 mL	divers
Tubes microfuges de 500 μl	divers
Lingettes Kimwipes	divers		Lingettes jetables

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