Drosophile In Vivo L’imagerie calcique : une méthode d’imagerie fonctionnelle de l’activité neuronale

Résumé

Source : Hancock, C. E., et al. Imagerie calcique optique in vivo de la plasticité synaptique induite par l’apprentissage chez Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit l’imagerie calcique in vivo dans les neurones de la drosophile à l’aide de GCaMP. Le clip du protocole présenté montre comment enregistrer les changements de fluorescence GCaMP des neurones du corps du champignon pendant une expérience de conditionnement olfactif.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Imagerie calcique in vivo

1. Utilisez un microscope multiphotonique équipé d’un laser infrarouge et d’un objectif d’immersion dans l’eau (voir Tableau des matériaux), installé sur une table isolée des vibrations. Pour la visualisation d’indicateurs calciques basés sur la GFP, réglez le laser sur une longueur d’onde d’excitation de 920 nm et installez un filtre passe-bande GFP.
2. À l’aide du bouton de réglage Z gro....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
1-octen-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis	O5284	Produit chimique utilisé comme odorisant
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis	218405	Produit chimique utilisé comme odorisant
4-méthylcyclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis	153095	Produit chimique utilisé comme odorisant
Filtre passe-bande pour EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Iéna, Allemagne
huile minérale	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis	Référence M8410	Utilisé comme diluant pour les odorisants
Laser Ti-Sapphire Chameleon Vision 2 à verrouillage de mode	Coherent Inc., Santa Clara, Californie, États-Unis		Laser femtoseconde infrarouge accordable
Microscope multiphotonique LSM 7MP équipé de détecteurs BiG	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Iéna, Allemagne		Microscope multiphotonique, plusieurs entreprises fournissent des appareils similaires.
Objectif d’immersion dans l’eau Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Iéna, Allemagne	Référence 421452-9900-000	Objectif W « Plan-Apochromat » 20x/1.0 DIC M27 70mm
Le logiciel Visual Basics of Applicatons (VBA) pour recevoir un déclencheur de l’appareil de diffusion d’odeurs et le dispositif d’application de chocs électriques (alimentation) pour interagir avec le logiciel ZEN de Zeiss qui contrôle le microscope	Écrit sur mesure et disponible sur demande	N.A.	N.A.