$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Le protocole suivant est un extrait de Kudumala et al, Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp.(2019).
SWIP
NOTE : Nous décrivons la méthode manuelle d’évaluation du SWIP chez les vers de type sauvage traités avec de l’AMPH. Nous discutons également brièvement du suivi des vers et d’une analyse plus approfondie de la cinétique des vers à l’aide d’un traqueur de vers automatisé et d’un logiciel de suivi, qui ont été décrits précédemment par Hardaway et al.
- Méthode manuelle pour tester le SWIP
- Aliquote 40 μL d’une solution de saccharose de 200 mOsm/L, avec ou sans AMPH de 0,5 mM, dans une plaque de verre. Sous le stéréoscope, cueillez 8 à 10 vers de la fin du stade L4 avec un cil ou un pic en platine et immergez le pic dans la plaque contenant la solution jusqu’à ce que les vers se détachent du pic et nagent dans la solution. Notez le nombre de vers ramassés dans le puits, démarrez le chronomètre, observez et notez le nombre de vers présentant un SWIP à chaque marque de minute.
- Copiez les données brutes dans une feuille de calcul et calculez le pourcentage de vers paralysés en divisant le nombre de vers paralysés à chaque minute par le nombre total de vers testés tout au long de l’essai, puis multipliez par 100. Copiez les valeurs en pourcentage dans n’importe quel logiciel graphique et statistique et tracez les données avec des valeurs en pourcentage sur l’axe Y et le temps sur l’axe X à l’aide du format graphique XY.
- Effectuer une ANOVA à deux facteurs suivie d’une analyse post-hoc (p. ex., post-test de Bonferroni) pour tester la signification statistique entre le contrôle, les groupes AMPH et le moment du traitement.
- Analyse automatisée du SWIP
- Effectuez une analyse automatisée sur un seul ver à la fois. Le protocole de configuration de la caméra, le logiciel de traquage des vers et le script d’exécution de l’analyse du logiciel de suivi sont décrits en détail dans Hardaway et al.
- Brièvement, placez un seul hermaphrodite de stade L4 tardif dans une plaque de verre à l’aide d’un cure-cils, comme décrit dans la méthode manuelle de la section 1.1.2. Enregistrez des vidéos de natation d’un ver à la fois et utilisez le logiciel de traquage des vers pour calculer la fréquence des flexions du corps.
- Suivez le script fourni avec le logiciel de suivi pour obtenir la fréquence de battage des vers et pour générer des cartes thermiques à partir des données de battage des vers.