Essai de ponte : une méthode pour quantifier le comportement de ponte de C. elegans

Résumé

Source : Lee, S. Y. et Kang, K. Mesure de l’effet des produits chimiques sur la croissance et la reproduction de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

Le comportement de ponte de C. elegans peut fournir des informations importantes dans les études de développement, de reproduction et d’anatomie. Cette vidéo présente les étapes importantes d’un test de ponte d’œufs et montre un exemple d’expérience dans lequel un médicament est testé pour sa toxicité pour la reproduction.

Protocole

Lee et Kang, Mesurer l’effet des produits chimiques sur la croissance et la reproduction de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1. Essai de ponte de C. elegans

1. Incuber les œufs synchronisés selon l’âge sur la plaque NGM contenant du DMSO ou de l’étoposide pendant 64 h (avant la première naissance) jusqu’au stade jeune adulte à 20 °C
   REMARQUE : Il est facultatif d’utiliser les vers des expériences de mesure de croissance. Il est pratique de faire la mesure de la croissance et l’essai de ponte ensemble.
2. Transférez 5 vers adultes dans les nouvelles plaques NGM sans produits chimiques (condition 1, traitement chimique dans un certain laps de temps, de l’œuf au stade jeune adulte) ou dans la nouvelle plaque NGM contenant le même prétraitement chimique (condition 2, exposition continue aux produits chimiques pendant toute la durée de l’expérience), puis incubez-les pendant 24 h.
   REMARQUE : Il est recommandé de faire des réplicats en utilisant 3 à 5 plaques NGM pour chaque traitement ; Ces réplicats peuvent être utilisés pour l’analyse statistique.
3. Transférez dans la nouvelle plaque NGM comme décrit ci-dessus et comptez le nombre d’œufs chaque jour. Comptez les vers qui ont rampé, sont morts et ont éclos à l’intérieur.
4. Répétez ces étapes jusqu’à ce que les vers ne pondent plus d’œufs, généralement dans 5 jours.
5. Calculez le nombre d’œufs pondus par ver dans chaque assiette et additionnez ces valeurs tous les jours pendant 5 jours pour déterminer le nombre total d’œufs pondus.
   REMARQUE : Excluez du calcul le nombre de vers qui se sont échappés et qui ont éclos en interne.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Caenorhabditis elegans N2	Centre de Génétique Caenorhabditis (CGC)		Type sauvage
sulfoxyde de diméthyle	Sigma, États-Unis	D2650
Escherichia coli OP50	Centre de Génétique Caenorhabditis (CGC)
Etoposide	Sigma, États-Unis	E1383
35 × boîte de Pétri de 10 mm	SPL Life Sciences, Corée du Sud	Référence 10035
Microscope stéréo	Nikon, Japon	SMZ800N