C. elegans Dissection de blastomères : procédé d’extraction de la coquille d’œuf et de dissociation de cellules embryonnaires

Abstract

Source : Hsu, C. R., et al. Reconstitution in vitro de motifs de contact cellulaire spatial avec des blastomères embryonnaires isolés de Caenorhabditis elegans et des billes de polystyrène adhésives.J. Vis. Exp.(2019).

Cette vidéo présente une méthode permettant d’isoler les blastomères de C. elegans des embryons précoces. Les cellules résultantes conviennent à la culture cellulaire ou aux expériences ex vivo.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Hsu et al, Reconstitution in vitro des modèles de contact cellulaire spatial avec des blastomères embryonnaires isolés de Caenorhabditis elegans et des billes de polystyrène adhésives, J. Vis. Exp.(2019).

1. Isolement d’un blastomère embryonnaire
2. Portez des gants et une blouse de laboratoire pour éviter les coupures et le contact avec la solution de blanchiment.
   1. Tenez chaque extrémité d’un microcapillaire (capacité ; 10 μL) avec l....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ensemble de tube d’aspirateur	Pour l’isolement des blastomères.
Caenorhabditis elegans souche : N2, de type sauvage	Centre de Génétique Caenorhabditis	N2	Souche utilisée dans cette étude
Caenorhabditis elegans souche : KSG5, génotype : zuIs45 ; itIs37	en interne	KSG5	Souche utilisée dans cette étude
Mircopipets calibrés, 10 μL	Drummond	Référence 21-180-13	Pour l’isolement des blastomères
CD Concentré lipidique	Technologies de la vie	11905031	Pour l’isolement des blastomères. Travailler dans la hotte de culture tissulaire.
Clorox	Clorox	N. A.	Pour l’isolement des blastomères. Ouvrez une nouvelle bouteille lorsque le traitement à l’hypochlorite ne fonctionne pas bien.
Support de lamelle	En interne	N.A.	Pour l’isolement des blastomères.
Microscope de dissection : Zeiss Stemi 508 avec support M. La source de lumière est une LED intégrée. Le grossissement de l’oculaire est de 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Pour l’isolement des blastomères.
Sérum fœtal bovin, One Shot qualifié, origine Canada	Gibco	A3160701	Pour l’isolement des blastomères. Travailler dans la hotte de culture tissulaire.
Bd	14-826AA	Pour l’isolement des blastomères
Inuline	Alfa Aesar	AAA1842509	Pour l’isolement des blastomères
MEM Solution vitaminique (100x)	Gibco	11120052	Pour l’isolement des blastomères.
Multitest Slide 10 Puits	MP Biomédical	ICN6041805	Pour l’isolement des blastomères
Pénicilline-Streptomycine (10 000 U/mL)	Gibco	15140148	Pour l’isolement des blastomères.
Polyvinylpyrrolidone	Bioréactifs Fisher	BP431-100	Pour l’isolement des blastomères
Chlorure de potassium	Boutique bio	Réf. POC888	Pour l’isolement des blastomères
Gibco	21720024	Pour l’isolement des blastomères. Travailler dans la hotte de culture tissulaire.
Chlorure de sodium	Boutique bio	SOD001	Pour l’isolement des blastomères
solution d’hydroxyde de sodium, 10 N	Fisher Chemical	SS255-1	Pour l’isolement des blastomères
Filtres pour seringues, PTFE, non stériles	Basix	13100115	Pour l’isolement des blastomères.
Tygon S3,, Formulation E-3603, Diamètre intérieur 3.175 mm	Plastiques Saint Gobain Performance	Référence 89403-862	Pour l’isolement des blastomères.
Tygon S3,, Formulation E-3603, Diamètre intérieur 6,35 mm	Plastiques Saint Gobain Performance	Référence 89403-854	Pour l’isolement des blastomères.