Article de méthode

Essai de locomotion larvaire : méthode à haut débit pour étudier la toxicité neurocomportementale d’un composé chez les larves de poisson-zèbre

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Zhang B., et al. Étude des effets neurocomportementaux des polluants environnementaux sur les larves de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2020)

Cet article décrit la réponse comportementale du poisson-zèbre aux composés toxiques en surveillant la locomotion des larves. Le protocole examine en outre un exemple de la réponse des larves de poisson-zèbre aux polluants environnementaux.

Protocole

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Préparation au test de comportement

  1. Transférez 800 μL de solution d’exposition dans chaque puits de la microplaque à 48 puits.
    note: Utilisez 16 puits pour chaque groupe (c.-à-d. la solution témoin, 5 μg/L et 50 μg/L).
  2. À l’aide d’une pointe de pipette de 1 mL, transférez 200 μL de solution d’exposition avec une larve de la boîte de Pétri en verre dans un puits de la microplaque à 48 puits.
  3. Transvaser 4 mL de solution d’exposition dans chaque puits de la microplaque à 6 puits.
    note: Utilisez une microplaque à 6 puits pour chaque groupe.
  4. À l’aide d’une pointe de pipette de 1 mL, transvaser 200 μL de solution d’exposition avec deux larves dans chaque puits de la microplaque à 6 puits.
    note: Chaque groupe a six groupes répétitifs.
  5. Assurez-vous que la température de la salle d’essai est de 28 °C 2 h avant le test.
    note: Les tests comportementaux sont généralement effectués l’après-midi.

2. Test de locomotion et d’angle de trajectoire

  1. Enregistrez le protocole et baissez la lumière de la salle de test.
  2. Acclimatez les larves dans le système pendant 10 minutes et cliquez successivement sur le bouton « Expérience » « Exécuter », puis choisissez le dossier où les fichiers de l’expérience sont enregistrés et entrez le nom du résultat.
  3. Cliquez tour à tour sur le bouton « Arrière-plan » « Démarrer » pour démarrer le test.
  4. Cliquez sur le bouton « Test » « Stop » à tour de rôle pour arrêter l’expérience à la fin du test.
    note: Le système affiche les données testées à l’arrêt du système. Les données comprennent la distance parcourue à trois classes de vitesse et les numéros d’angle de trajectoire à huit classes d’angle de chaque minute. Pour le test de locomotion dans l’exemple présenté, la distance totale dans chaque période de lumière (10 min) est calculée et la différence entre le groupe témoin et les groupes de traitement est comparée.
  5. Transférez la microplaque à 48 puits dans l’incubateur de lumière pour d’autres expériences.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Microplaque à 48 puits Corning Référence 3548Logement Embyros
Microplaque à 6 puits Corning Référence 3471Logement Embyros
Zebrabox point de vue ZebraBox (en anglais) Instrument de comportement
ZebraLab (en anglais) point de vue ZebraLab (en anglais) Logiciel de comportement
pipette Eppendorf 3120000267Solution de transfert

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Mots-clés

Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

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