Injection intracanalaire : administration du mélange d’injection dans les canaux de la glande mammaire de la souris

Résumé

Source : Xiang, D., et al. Modélisation du cancer du sein via une injection intracanalaire d’un adénovirus exprimant Cre dans la glande mammaire de souris. J. Vis. Exp (2019).

Cette vidéo décrit une technique d’injection intracanalaire où nous administrons un mélange d’injection dans les canaux des glandes mammaires de souris.

Protocole

1. Injection intracanalaire

1. Utilisez des techniques aseptiques tout au long de l’intervention chirurgicale.
2. Faire une incision sur la peau à une longueur de ~1 cm entre les deux quatrièmes MG inguinales (Figure 1). Séparez soigneusement le lambeau cutané (avec le MG) du péritoine pariétal de manière à visualiser l’arbre canalaire mammaire.
3. Tenez soigneusement le mamelon à l’aide d’une pince d’horloger et retirez le mamelon extérieur sans couper la peau à proximité, à l’aide d’une micro-dissection ciseaux.
4. Chargez ~3 à 5 μL de mélange d’injection Ad-Cre dans une seringue Hamilton de 25 μL avec une aiguille à embase métallique de 33 G fixée. Estimez le volume du mélange injecté dans la seringue en fonction du colorant bleu inclus dans le mélange.
   note: Utilisez un volume plus petit (p. ex., 3 μL) lorsque vous injectez dans des MG de femelles âgées de 3 à 4 semaines et un volume plus important (p. ex., 10 μL) lorsque vous injectez dans des MG de femelles allaitantes.
5. Tenez doucement le bord du lambeau cutané à l’aide d’une pince à épiler fine et incurvée et injectez lentement le mélange d’injection Ad-Cre dans le mamelon, tout en surveillant la propagation du colorant bleu dans l’arbre canalaire mammaire. Maintenez le taux d’injection aussi bas que possible pour éviter d’endommager la lumière canalaire.
   note: Le liquide injecté (comme illustré par le colorant bleu de bromophénol inclus) se répandant dans tout l’arbre canalaire sans fuir dans le compartiment stromal indique une injection intracanalaire réussie.
6. Retirez doucement l’aiguille du mamelon pour éviter toute fuite du liquide injecté.
7. Examinez le côté distal (c’est-à-dire en s’éloignant du mamelon) du MG ou la zone environnante du mamelon injecté. Notez qu’un colorant bleu gonflant (c’est-à-dire un colorant se diffusant dans le stroma voisin) indique une injection de coussinet adipeux mammaire plutôt qu’une injection intracanalaire réussie.
8. Fermez les plaies chirurgicales (à partir de 1.2) dans la peau avec des pinces à plaie.

2. Soins postopératoires

1. Retirez la souris de l’anesthésie et placez-la sur un coussin chauffant à l’intérieur d’une cage propre pour la récupération.
2. Administrer à nouveau le méloxicam par voie sous-cutanée à 5 mg/kg, 24 h après la chirurgie.
3. Surveillez l’état général de l’animal et recherchez des signes d’infection au site d’incision pendant 5 jours.
4. Les clips de plaie sont retirés ~7 à 10 jours après la chirurgie.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Aiguille de calibre 33	Hamilton	Référence 7803-05	Point Style 3 émoussé
Clip reflex de 7 mm	Braintree Scientific	RF7 CS
Adénovirus, Ad-K5-Cre	Noyau de vecteur viral de l’Université de l’Iowa	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
Adénovirus, Ad-K8-Cre	Noyau de vecteur viral de l’Université de l’Iowa	Ad5mK8-nlsCre
Bleu bromophénol	Sigma-Aldrich	Réf. B0126-25G
Seringue Hamilton	Hamilton	Référence 7636-01	0,025 mL
Ciseaux de micro-dissection	Pentair	9 millions	Pince d'horloger
Pince à épiler micro-dissection	Dumont	M5