Injection dans la veine caudale : méthode d’administration de cellules cancéreuses pour des études métastatiques dans un modèle murin

Résumé

Source : Warren et al., Utilisation combinée de tests de métastases de la veine caudale et d’imagerie in vivo en temps réel pour quantifier la colonisation métastatique du cancer du sein et la charge dans les poumons. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit une technique d’injection de cellules cancéreuses marquées par injection de veine de queue dans un modèle murin. Nous surveillons davantage la formation et la croissance des métastases du cancer du sein à l’aide de l’imagerie en temps réel d’animaux vivants in vivo.

Protocole

1. Injection dans la veine caudale de cellules cancéreuses marquées

REMARQUE : L’étape 1.2.4 a été optimisée pour les cellules 4T1 en croissance chez des souris BALB/c syngéniques. Si d’autres lignées cellulaires cancéreuses et souches de souris sont utilisées, le nombre de cellules injectées et la durée du test doivent d’abord être optimisés.

1. Développez les lignées cellulaires 4T1 générées à l’étape 2 sur deux boîtes de 15 cm dans un milieu de croissance complet afin que les cellules excédentaires soient disponibles le jour de l’injection.
2. Préparez les cellules pour l’injection dans la veine de la queue comme suit :
   1. Aspirez le milieu et rincez les plaques cellulaires avec 1x PBS.
   2. Trypsinisez les cellules avec 5 ml de trypsine par plaque de 15 cm pendant 2 à 5 minutes (les cellules doivent rincer librement le fond du puits). Transférez toutes les cellules dans un tube conique. Lavez les cellules restantes de la boîte de culture tissulaire avec suffisamment de milieu de croissance complet pour éteindre la trypsine et ajoutez le lavage dans le même tube conique.
   3. Comptez les cellules à l’aide d’un compteur de cellules automatisé pour déterminer le nombre total de cellules.
   4. Centrifugez les cellules à 122 x g pendant 3 minutes, aspirez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans 1 x PBS à la concentration souhaitée. Ici, 2,5 x 10⁴ cellules sont injectées dans chaque souris dans 100 μL de PBS, de sorte que les cellules sont remises en suspension à 2,5 x 10⁵ cellules/mL. Conservez les suspensions cellulaires sur de la glace jusqu’à l’injection.
      REMARQUE : il est important de limiter le temps entre la trypsinisation des cellules et l’injection dans la veine caudale à environ 1 heure.
3. Injectez les cellules 4T1 de l’étape 1.2.5 chez la souris par la veine latérale de la queue comme suit :
   1. En travaillant dans une hotte à l’animalerie, mélangez doucement mais soigneusement les cellules en inversant le tube ou en utilisant une seringue de 1 mL pour vous assurer qu’elles sont uniformément remises en suspension. Assurez-vous toujours que les cellules sont remises en suspension avant de charger la seringue.
   2. Chargez une seringue Luer-lock de 1 mL avec une suspension cellulaire et expulsez les bulles d’air en excès. Placez une aiguille de calibre 30 de 1/2 pouce sur la seringue avec le biseau vers le haut et expulsez les bulles d’air.
   3. Placez délicatement la souris dans une contention pour rongeurs.
   4. Les veines latérales de la queue doivent être visibles et dilatées. Sinon, pincez doucement la base de la queue et trempez-la dans de l’eau chaude du robinet pour dilater les veines.
      note: La dilatation des veines peut également être obtenue en plaçant la cage de souris sous une lampe chauffante et/ou sur un coussin chauffant.
   5. Utilisez une lingette imbibée d’alcool pour nettoyer la queue. Insérez l’aiguille dans la veine de la queue, côté biseau vers le haut, et injectez 100 μL de suspension cellulaire.
      note: Si l’aiguille est correctement insérée dans la veine, elle devrait facilement glisser légèrement vers l’avant et vers l’arrière, et il ne devrait pas y avoir de résistance lorsque le piston est poussé. Les injections réussies devraient également entraîner une « bouffée » dans laquelle la couleur bleue de la veine devient blanche pendant quelques secondes après l’injection.
4. Retirez lentement l’aiguille et, à l’aide d’une gaze stérile, appliquez une pression sur le site d’injection pour arrêter tout saignement.
5. Remettez la souris dans sa cage et surveillez-la pendant 15 minutes pour assurer une récupération complète. Les souris doivent être examinées pour détecter des signes de douleur ou de détresse 3 fois par semaine.
6. Surveiller la formation et la croissance de métastases chez les souris pendant 3 à 6 semaines (en fonction de la lignée cellulaire et de la souche de souris) à l’aide d’un appareil d’imagerie in vivo sur des animaux vivants (voir les étapes 1.5 et 1.6).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
2,5 % de trypsine	Gibco	Référence 15090-046	Trypsine pour la culture tissulaire
Lingettes imbibées d’alcool			Pour la stérolisation du site d’injection avant les injections de la veine caudale
Souris BALB/C (femelle, 6 semaines)	Taconique	BALB-F	Pour la colonisation métastatique de la veine caudale et les dosages de charge
Dulbecco&39 ; S solution saline tamponnée au phosphate	Himedia	Réf. TS1006
Edta	VWR	Référence 97061-406	Utilisé pour diluer la trypsine pour la culture tissulaire
FBS 100 % origine US	VWR	Référence 97068-085	Composant du milieu de croissance complet
L-Glutamine	Gibco	Référence 25030-081	Composant du milieu de croissance complet
Cellules cancéreuses du sein de souris, 4T1	Institut du cancer Karmanos	Aslakson, CJ et al., 1992	Lignée cellulaire de cancer du sein métastatique de souris
Pénicilline Streptomycine	Gibco	Référence 15140-122	Composant du milieu de croissance complet