Administration intrabronchique : technique d’administration sélective d’un agent expérimental dans un poumon de souris

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Approches non opératoires d’intubation et d’accouchement de l’IB

1. Approche IB de la canulation lobaire sélective du poumon droit distal
   1. Après avoir effectué une canulation intratrachéale (IT) (utilisez la main dominante pour intuber le cathéter étendu dans la trachée via la cavité buccale), faites pivoter la planche en plastique de +30° (Figure 1A).
   2. Tenez le moyeu du cathéter et guidez-le naturellement parallèlement à la ligne médiane de la souris, en l’étendant jusqu’à des profondeurs basées sur le poids, comme décrit dans le Tableau 1.
      note: La résistance à ces profondeurs est à noter. À ce stade, la souris deviendra légèrement tachypnéique, comme expliqué dans les résultats représentatifs. Pour un opérateur expérimenté, environ 90 % des tentatives réussiront à canuler le poumon droit (avec tachypnée notée).
   3. Administrer 20 μL de colorant bleu Evans à 0,3 % (EBD, voir tableau des matériaux) avec une pointe de chargement de gel.
   4. Distribuez 1 à 2 aliquotes (0,1 ml chacune) d’air à l’aide du compte-gouttes en verre.
      note: Cela garantit l’élimination de la solution résiduelle d’EBD (ou des agents expérimentaux) de l’intérieur du cathéter.
   5. Retirez le cathéter, puis maintenez la position de la souris pendant 30 s.
   6. Placez l’animal sur une couverture chauffante jusqu’à ce qu’il reprenne conscience. La récupération est généralement terminée en 2 minutes.
2. Approche IB de la canulation segmentaire sélective du poumon gauche distal
   1. Après avoir effectué la canulation IT (utilisez la main dominante pour intuber le cathéter étendu dans la trachée via la cavité buccale), tournez la planche en plastique de -74° (Figure 1B).
   2. Tenez le moyeu du cathéter et appliquez une légère pression pour faire avancer le cathéter dans la bronche principale gauche, tout en exerçant une pression modeste vers le bas (90°) et vers le serre-livres. Aux profondeurs indiquées dans le tableau 1, l’opérateur doit noter la résistance lorsque les segments inférieurs du poumon gauche sont engagés. En cas de tachypnée, retirez le cathéter à la position 20-25 mm et réessayez.
   3. Après la canulation des segments pulmonaires inférieurs gauches, un changement de position est nécessaire pour permettre l’assistance gravitationnelle pour l’administration de l’agent. Faites pivoter la carte en plastique de -30° (Figure 1B).
   4. Fournit 40 μL de 0,3 % d’EBD avec un embout de chargement de gel.
      note: Il est possible d’administrer un plus grand volume d’agent parce que le poumon gauche n’a qu’un seul lobe.
   5. Distribuez 1 à 2 aliquotes (0,1 à 0,3 mL chacune) d’air à l’aide des compte-gouttes en verre.
      note: Cela garantit l’élimination de tout EBD résiduel (ou agents expérimentaux) à l’intérieur du cathéter.
   6. Retirez le cathéter, puis maintenez la position de la souris pendant 30 s.
   7. Placez l’animal sur une couverture chauffante jusqu’à ce qu’il reprenne conscience. La récupération est généralement terminée en 2 minutes.

Figure 1 : Approche pour la canulation et l’administration sélectives du poumon droit/gauche.(A) Pour cibler le poumon droit, la planche en plastique est tournée de +30°, ce qui facilite l’engagement sélectif de la bronche principale droite. Le cathéter est avancé (selon les distances proposées dans le tableau 1) pour s’engager sélectivement dans les lobes du côté droit. 20 μL d’EBD à 0,3 % ont été administrés. Dans ~90 % des tentatives, le lobe postérieur est canulé. Les 10 % restants des tentatives engagent le lobe inférieur. (B) Pour cibler le poumon gauche, la planche en plastique est d’abord tournée de -74° pour l’engagement de la tige principale gauche. Après l’intubation réussie du cathéter, la rotation est ensuite réduite à -30° pour permettre à la gravité d’aider à l’administration de l’agent. Pour prouver l’engagement sélectif du côté gauche, 40 μL de 0,3 % d’EBD ont été administrés. Cette approche ciblait systématiquement (100 % des tentatives) les segments basilaires du poumon gauche.

Tableau 1 : Profondeur suggérée pour l’insertion du cathéter.Les profondeurs de cathéter prédites nécessaires pour canuler sélectivement les poumons distaux et proximaux ont été déterminées empiriquement à l’aide de souris C57BL/6 de différents poids (total = 79 souris).