Dosage de l’extraction d’ARN : une méthode pour extraire de l’ARN de cellules cancéreuses du poumon transfectées par des miARN

Résumé

Source : Hossian, A. K. M. N. et al., Analyse des traitements combinatoires de miARN pour réguler le cycle cellulaire et l’angiogenèse. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit le protocole d’extraction d’ARN à partir de cellules cancéreuses du poumon transfectées par des miARN. Cette approche peut être utilisée pour identifier une activité de traitement combinatoire des miARN dans l’arrêt du cycle cellulaire et l’angiogenèse.

Protocole

1. Transfection miR-143 et miR-506

ATTENTION : Utilisez des gants en latex, des lunettes de protection et une blouse de laboratoire lors de la réalisation des expériences décrites. Si nécessaire, utilisez l’enceinte de biosécurité avec le ventilateur de l’armoire allumé, sans bloquer les voies respiratoires ni perturber le flux d’air laminaire. Réglez toujours la fenêtre de protection en verre à la hauteur appropriée, comme décrit par le fabricant.

1. Implantez des cellules de CPNPC A549 dans une fiole de^{25 cm 2}/plaque à 6/96 puits dans un milieu DMEM/F12K complété par 10 % de FBS et 1 %....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
A549 Cellules cancéreuses du poumon non à petites cellules	ATCC	ATCC CCL-185
Silencieux Ambion Contrôle Négatif N°1 siRNA	Ambion	AM4611
has-miR-143-3p miRNA Mimic	Abm	MCH01315
has-miR-506-3p miRNA Mimic	Abm	MCH02824
Sérum fœtal bovin (FBS)	Fisher Scientific	10438026
Solution saline tamponnée au phosphate HyClone (PBS)	Fisher Scientific	SH30256FS
DMEM 4,5 g/L de glucose, sans pyruvate de sodium, avec L-glutamine	VWR	VWRL0100-0500
Invitrogen UltraPure Eau distillée sans DNase/RNase	Invitrogen	Tél. : 10-977-015
Kits d’ARN rapide	Recherche Zymo	Réf. R1055
éthanol, absolu (200 proof), qualité biologie moléculaire,	Bioréactifs Fisher	BP2818500
-80 °C Congélateur	VWR	VWR40086A
Nanogoutte	Thermo Scientific	NanoDrop un C
Plaque à 96 puits	CELLTREAT Scientifique	Tél. : 50-607-511
Pénicilline-streptomycine 10/10	Produits biologiques Antlanta	Réf. B21210
Incubateur à CO2	Thermo Scientific	HERAcell 150i
DNASE	Recherche Zymo	E1010
Mélange de nutriments F-12K (Mod. de Kaighn) avec L-glutamine, Corning	Corning	Réf. 45000-354
Sérum fœtal bovin - Premium	Produits biologiques Antlanta	Réf. S11150
Centrifugeuse à température contrôlée matchine	Thermo Scientific	ST16R
Micro centrifugeuse matchine à température contrôlée	Eppendrof	5415R