Extraction de miARN : une méthode pour extraire des miARN d’un échantillon de plasma

Résumé

Source : Mensah, M. et. al., Biopsie liquide basée sur les microARN : l’expérience du classificateur de signature de miARN plasmatique (MSC) pour le dépistage du cancer du poumon. J. Vis. Exp. (2017).

Les microARN (miARN) sont de petits ARN non codants spécifiques aux tissus qui régulent l’expression des gènes et pourraient représenter des candidats idéaux pour la détection précoce du cancer du poumon. Dans le protocole présenté, nous isolerons des microARN à partir d’échantillons de sang de patients pour un dépistage précoce du cancer du poumon.

Protocole

1. Prélèvement d’échantillons de plasma

1. Prélever 10 ml d’échantillon de sang total dans des tubes Vacutainer avec du K₂EDTA enrobé de pulvérisation et le conserver à température ambiante.
   note: Pour minimiser l’hémolyse, séparez le plasma dans les 2 heures. Ne stockez pas la totalité du sang à basse température (c’est-à-dire 4 °C) pour éviter le choc thermique et la lyse cellulaire qui entraînent une libération non spécifique de miARN.
2. Dans l’espace de 1 h, séparer le plasma par une première étape de centrifugation à 1 258 x g et 4 °C pendant 10 min.
3. Transvasez le surnageant plasmatique dans u....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
1x PBS	Lonza	BE-17-516
Tampon 20xTE, pH 8,0	Sonde moléculaire	Réf. T11493	Diluer la solution mère 20X pour avoir la concentration finale de 0,1X dans de l’eau sans nucléases
Eau sans nucléases
Kit de tissus miARN Maxwell RSC	Promega	AS1460	Le kit contient une solution d’homogénéisation, une DNase I, une protéinase K, un tampon de lyse et des cartouches. Pour le 1-thioglycérol, l’inhalation et le contact avec la peau et les yeux doivent être évités. Utilisez-le sous une armoire à fumée.
Vacutainer Safety-Lock Kit de prélèvement de sang	Becton Dickinson	Référence 367286-364815
Mélangeur Vortex	Velp Scientifica	F202A0173
Agitateur ThermoMixer en T	Euroclone	N° A00564	Amenez le Thermo Mixer à 37 °C avant de commencer l’extraction de l’ARN
Instrument Maxwell RSC	Promega	AS4500
Flacons cryogéniques 1,5 ml	Sigma-Aldrich	Z359033