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Préparation de fractions subcellulaires à partir de cellules leucémiques : une méthode pour générer des fractions cellulaires et nucléaires à partir de cellules leucémiques

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Hay, J., et al. Fractionnement subcellulaire des cellules de leucémie lymphoïde chronique primaire pour surveiller le trafic de protéines nucléaires/cytoplasmiques. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit la préparation des fractions subcellulaires à partir de cellules leucémiques, qui est une méthode pour générer des fractions cellulaires et nucléaires à partir de cellules leucémiques. Les fractions nucléaire et cytoplasmique peuvent être utilisées pour une analyse ultérieure en aval.

Protocole

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1. Préparation de fractions subcellulaires à partir de cellules LLC

REMARQUE : Lors de la planification de la configuration expérimentale, incluez un puits de cellules non stimulées/non traitées à partir desquelles l’extrait cellulaire entier peut être généré.

  1. Effectuer la stimulation et/ou le traitement médicamenteux souhaité de la lignée cellulaire de la LLC MEC1 ou des cellules primaires isolées de la LLC en utilisant 10 – 20 x 106 cellules/condition. Les cellules seront ensuite utilisées pour le fractionnement subcellulaire ou pour générer un extrait de cellule entière, comme expliqué ci-dessous :....

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Tubes de microcentrifugation de 1,5 mLBiographie de Griener616201
EdtasigmaEds
Labnet VX100Fisher Scientifictourbillon
Kit d’extrait NucelarMotif actifRéf. 40010
Comprimés PBSFisher ScientificBR0014G
Sigma 3-16PSciQuipcentrifugeuse
Sigma 1-15PKSciQuipcentrifugeuse

Réimpressions et autorisations

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Mots-clés

Fractionnement subcellularfraction cytoplasmiquefraction nucl airelyse hypotoniqueextraction par d tergentprotocole de centrifugationisolation des prot ineslyse cellulairetube pour microcentrifugeuse

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