Prélèvement de moelle osseuse sur une patte postérieure de souris

Résumé

Source : Zhu, Y. P., Padgett, et al. Préparation de la moelle osseuse entière pour l’analyse par cytométrie de masse des cellules de la lignée des neutrophiles. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit un protocole détaillé permettant d'isoler la moelle osseuse entière fraîche des membres postérieurs de la souris afin d'étudier les anomalies de la moelle osseuse chez les patients atteints de troubles sanguins tels que la leucémie.

Protocole

1. Récolte de moelle osseuse de souris (BM)

1. Achetez des souris C57BL/6J auprès d’un vendeur commercial. Donnez la nourriture standard aux rongeurs et logez-les dans des cages de micro-isolement dans une installation exempte d’agents pathogènes.
2. Utilisez des souris mâles, âgées de 6 à 10 semaines, à des fins expérimentales. Euthanasier par inhalation de CO₂ suivie de la luxation cervicale.
3. Placez la souris sur un tampon chirurgical stérile avec l’abdomen vers le haut. Stérilisez la peau de l’abdomen et des membres postérieurs en pulvérisant de l’éthanol à 70 %. Utilisez une paire de ciseaux chirurgicaux à disséquer pour ouvrir la cavité abdominale.
4. Retirez la peau pour exposer les membres postérieurs. Utilisez une paire de pinces à pansement à bout émoussé pour maintenir le tibia de la souris juste en dessous de la cheville. Utilisez une autre paire de pinces à pansement incurvées pour stabiliser le tibia sous la pince à pansement à bout émoussé. Cassez le tibia et exposez l’os en arrachant le muscle à l’aide de la pince à pansement à bout émoussé.
   note: Le tibia est fixé de manière lâche à l’articulation du genou et peut être facilement retiré à l’aide de la pince à pansement à bout émoussé.
5. Placez le tibia dans du froid 1x PBS.
6. Ensuite, déplacez la pince de pansement incurvée stabilisatrice vers le bas jusqu’au fémur. Faites glisser la pince à pansement à bout émoussé sous l’articulation du genou et tenez la rotule. Disloquez la rotule en la tirant doucement vers le haut. Exposez le fémur en arrachant le muscle attaché à la rotule. Tenez le fémur exposé à l’aide de la pince à pansement incurvée et coupez le fémur du bas de l’os à l’aide de ciseaux chirurgicaux à disséquer.
7. Placez le fémur dans le froid 1x PBS.
8. Percez un trou dans un tube de microcentrifugation de 0,5 mL avec une aiguille de 18 G.
9. Placez le tibia et le fémur dans le même tube de microcentrifugation de 0,5 mL, l’extrémité ouverte des os tournée vers le bas vers le trou.
10. Placez le tube de 0,5 mL contenant le tibia et le fémur dans un tube de microcentrifugation de 1,7 mL.
11. Faites tourner les tubes à double couche contenant à la fois le tibia et le fémur à 5 510 x g pendant 30 s dans la microcentrifugeuse.
12. Assurez-vous que le BM est extrait des os et granulé au fond du tube. Mélangez le tube de 0,5 mL contenant les os sacrés. La souris BM est prête pour les prochaines étapes.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Souris : C57BL/6J	Le Laboratoire Jackson	N° de stock : 000664
Solution saline tamponnée au phosphate HyClone	GE Sciences de la vie	N° de catalogue (N°SH30256.01