Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.
1. Ponction de la moelle osseuse et préparation des échantillons
- Préparation du patient et du matériel
- Remplissez une ou deux seringues de 10 ml avec de la lidocaïne à 1 % à l’aide d’une aiguille de calibre 16. Remplacez l’aiguille par une aiguille de calibre 21.
- Mettez deux gouttes d’EDTA à 5 % sur un verre de montre.
- Installez des lames de verre (n = 15 avec numérotation et date cohérentes pour le patient) pour les préparations de frottis.
- Placez le patient en position de décubitus latéral. Localisez l’épine iliaque postérieure supérieure et marquez-la avec pen.
note: En général, l’épine iliaque postéro-supérieure est située à une largeur de main distale par rapport à la crête iliaque et à une largeur de main latérale à la ligne médiane. Chez les femmes, la colonne vertébrale réelle peut être un peu plus latérale, chez certains hommes un peu plus médiane.
- Désinfectez la peau avec de la chlorhexidine 0,5-1 % dans de l’éthanol à partir de la zone de biopsie prévue vers l’extérieur en cercles.
- Ouvrez l’emballage de gants stériles, enfilez les gants stériles et posez l’emballage sur la table pour créer un champ stérile. Ouvrez l’emballage avec l’aiguille d’aspiration et placez-le sur le champ stérile.
- Infiltrer la peau et le tissu sous-cutané et enfin le périoste. Au périoste, administrez la lidocaïne de manière à ce qu’une zone de 1 cm de diamètre ait été anesthésiée.
note: L’administration adéquate de lidocaïne au périoste est l’un des facteurs les plus importants pour le confort du patient. Testez si le périoste a été correctement anesthésié en tapotant l’emplacement de la biopsie prévu avec l’aiguille introduite et demandez au patient s’il ressent de la douleur. À noter : Les enfants sont complètement anesthésiés pendant toute la procédure.
- Tenez l'aiguille d'aspiration (15 Ga x 2,8") avec l'extrémité proximale dans la paume et l'index contre le côté de la tige métallique de l'aiguille près de la pointe ; cette position permet un meilleur contrôle.
- Introduisez l’aiguille avec un mouvement de rotation (en alternant rapidement le mouvement de pronation/supination) à travers la peau vers la colonne iliaque et mettez l’aiguille en contact avec la colonne iliaque postérieure.
- S’assurer que l’aiguille est introduite dans la zone anesthésiée du périoste ; le patient ne doit ressentir qu’une pression et aucune douleur. Si le patient ressent de la douleur, repositionnez l’aiguille ou administrez plus de lidocaïne.
- En exerçant une pression douce mais ferme, avancez l’aiguille tout en la faisant tourner dans un mouvement alterné dans le sens des aiguilles d’une montre et dans le sens inverse des aiguilles d’une montre. L’entrée dans la cavité médullaire est généralement détectée par une diminution de la résistance.
- Retirez le stylet de l’aiguille. Fixez une seringue vide de 10 ml à l’aiguille.
- Appliquez une pression négative en retirant le piston de la seringue en tirant doucement. Avertissez le patient qu’il peut ressentir une sensation de crampe et une douleur lors de l’aspiration de la moelle. Si les spicules de moelle osseuse ne sont pas libérés en quantité suffisante, une autre aspiration doit être effectuée en un seul prélèvement rapide. La plupart des spicules se trouvent dans les premiers 1 à 2 ml obtenus lors de l’extraction initiale. Aspirer seulement 1 à 2 mL pour éviter de diluer l’échantillon.
note: La dilution entraînera une hémodilution et peut fausser les résultats de la MRM.
- Retirez la seringue et replacez le stylet dans l’aiguille d’aspiration. Éjectez une partie de la moelle dans un verre de montre et le reste dans un tube de 8 mL recouvert d’héparine.
note: Retournez chaque tube immédiatement après avoir placé l’aspiration de moelle dans le tube de l’échantillon pour assurer une anticoagulation adéquate. La coagulation de la moelle osseuse est souvent à l’origine d’un matériel inapproprié. De la moelle osseuse supplémentaire peut être aspirée à partir du même endroit, mais de préférence, l’aiguille est avancée de 5 à 10 mm avant qu’une nouvelle aspiration ne soit prélevée. De préférence, il ne faut pas prendre plus de 2 tirages par niveau d’insertion. Assurez-vous de marquer les tubes avec des numéros croissants représentant le premier, le deuxième et/ou les tirages consécutifs. Il est courant d’utiliser le premier dessin pour l’analyse diagnostique la plus pertinente.
- Vous pouvez également retirer l’aiguille du lieu d’insertion et la réintroduire dans la cavité de la moelle à quelques millimètres du lieu d’insertion d’origine et répéter la procédure.
note: Ne pas aspirer plus de 1 à 2 ml par bouffée, afin d’éviter une contamination sanguine importante.
- Répétez l’opération aussi souvent que nécessaire. Lorsqu’une quantité suffisante de matériel pour le protocole d’étude clinique spécifique est aspirée, prélever l’aiguille de la moelle osseuse.
note: En cas d’aspirations lentes ou difficiles de la moelle osseuse, l’utilisation de seringues pré-rinçées avec un anticoagulant peut être utile. En cas de tapotement sec, effectuez une biopsie par trépan qui sort du cadre de ce manuscrit.
2. Préparation des frottis pour l’examen morphologique
- Pour une évaluation morphologique optimale, prélevez des spicules (par exemple à l’aide d’une spatule en plastique) dans l’aspiration du verre de la montre et placez-les sur une lame de verre.
- Placez doucement une autre lame de verre sur la lame avec la moelle et glissez-la doucement en évitant toute pression.
note: Ce n’est qu’en cas de très grands spicules de moelle osseuse qu’une légère pression peut être exercée, afin de diminuer l’épaisseur de l’étalement cellulaire. La procédure bénéficie de l’aide d’un assistant qui peut manipuler les tubes d’échantillons. Il est essentiel d’étiqueter avec précision les tubes avec le numéro de patient et le numéro du prélèvement séquentiel de moelle osseuse.
- Séchez soigneusement la lame, puis effectuez la coloration May Giemsa Grünwald (voir tableau des matériaux). Examinez la morphologie au microscope optique (voir Figure 1).
REMARQUE : La figure 1A montre les frottis de moelle osseuse saine composée de différents types de cellules fonctionnelles, tandis que la figure 1B montre un patient atteint de LMA avec principalement des blastes leucémiques. Pour mieux définir la charge leucémique résiduelle, un immunophénotypage doit être effectué.
